家蚕胚胎细胞系Bm-Em-1的建立和特性研究.pdfVIP

昆虫 学 报 AaaEntomologicaSinica，December2011，54(12)：1341—1347 ISSN0454 296 家蚕胚胎细胞系Bm．Em．1的建立和特性研究 李苗苗，郑桂玲，李长友 (青岛农业大学农学与植物保护学院，山东青岛266109) 摘要 ：昆虫细胞系在病毒生物学、基因功能的研究以及杆状病毒表达系统生产重组蛋白的应用中发挥着重要的作 用。本研究由家蚕 Bombyxmori“大造”品种反转期胚胎建立了～株细胞系Bm．Em一1，在含 10％胎牛血清的TNM— FH培养基中已传代40余代。显微观察表明，细胞形态主要为圆形和短梭形，细胞染色体呈短棒状和颗粒状，数 量多、异倍化，符合典型的鳞翅 目昆虫细胞染色体特征。RAPD鉴定结果表明，该细胞系来源于家蚕胚胎，其扩 增谱带与 BTI—TnSB1-4和Sf-9等细胞系明显不同。生长曲线测定结果表明，第28代细胞的群体倍增时间为82．2h。 病毒敏感性测定显示 ，该细胞系不能被苜蓿银纹夜蛾Autographacalifornica核型多角体病毒 (AcMNPV)感染，但对 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)高度敏感，96h的感染率为91．3％。结果说明该细胞系可作为家蚕病毒离体复制、 BmNPV表达系统以及家蚕基因功能研究的理想材料。 关键词：家蚕；细胞系；核型分析；RAPD指纹图谱 ；核型多角体病毒；病毒敏感性 中图分类号：Q965．8 文献标识码 ：A 文章编号：0454-6296(2011)12—1341-07 Establishmentand characterization of a new cellline Bm ．．Em ．．1 from Bombyxmoriembryos LIMiao—Miao，ZHENGGui—Ling，LIChang—You (CollegeofAgronomyandPlantProtection，Qingdao AgricuhuralUniversity，Qingdao，Shandong266109，China) Abstract：Insectcelllineisoneofthekeycomponentsinbaculovirusexpressionvectorsystem andplays essentialroles in baculoviralbiology，identification ofgene function，and expression ofrecombinant proteins．etc．Inthisstudy，anew celllinedesignatedasBm—Em 1from theembryonictissueofBombyx mori(Lepidoptera：Bombycidae)strainDazaowasestablished，andthiscelllinehadbeensubcuhured over40passagesonTNM—FH medium supplementedwith 10％ fetalbovineserum．1nve~edmicroscope observationshowedthatthiscelllinehastwomajormorphologicaltypes。．e．，roundcellsandspindle． shapedcells，andthechromosomesofthecelllinewerecondensedintoshortrodsandgranule，typicalof lepidopterancellline．Random amplification ofpolymorphicDNA (RAPD)analysisshowedthatthe DNA profileofthecelllineBm—Em一1wassimilarwith thatofthe embryonic tissue ofB．mori．but differentfrom thatofBTI—Tn5B1-4 and Sf-9 celllines． Growth CHIVe analysis ind