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4 3 1 ( ) V o.l 4 3 N o. 1
2005 1 JOU RNAL OF J IL IN UN IVERS ITY ( SCIENCE ED IT ION ) J an 2005
2+
Zn
( , 130022)
, ,
( , 1300 62)
从人胚肝组织中提取总 RNA, 以逆转录聚合酶链式反应( RTPCR ) 法获得人内皮抑素
编码序 , 采用定点突变技术将H is2 和H is4 双突变为L eu2 和V al4. 将突变基因 cDNA 插入
含有T 7 启动子的质粒 pET28b 中构建表达质粒 pM endo, 转化大肠杆菌 BL2 1( DE3) , 筛选表
达菌株 BL 21M ute, 表达菌株经 IPTG 诱导后以包涵体方式产生大量内皮抑素突变蛋白.
SDSPAGE分析表明, 表达的重组蛋白占菌株可溶性蛋白质的30% . 复性纯化的内皮抑素突
变蛋白纯度达到 98% , 失去抑制人脐静脉内皮细胞增殖的活性.
内皮抑素; 克隆; 突变; 大肠杆菌
Q 784 A ( 2005) 0 1010 606
2+
SiteDirectedMutation on Zn Binding Site ofEndostatin and
Cloning, Expression ofMutantGene
WANG Qun
(NationalK ey Laboratory of Rare E arth Chem istry and P hysics, Changchun Institute of App lied Chem istry,
The ChineseA cademy of ciences, Changchun 130022, China)
MA Jun, H E W e,i WAN G H u i
(Changchun Institute of B iolog icalProducts, ChinaN ationalB iological T echnology Corp oration, Chang chun 1300 62, China)
Ab stract: H um an endostat in cDNA w as c loned from total RNA of hum an em bryo liver tissu e by RT PCR.
Endostatin DNA sequ ence encoded H is2 and H is4 w ere double changed to L eu2 and V al4 using site d irected
m utat ion technique. T he m utan t endostatin cDNA w as in serted into the pET 28b containing prom oter T 7. T he
recom b inant plasm id tran sform
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