紫杉醇对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第 37期 紫杉醇对肝癌 HepG2细胞增殖 及凋亡的影响 吴裕文 (宜春市人民医院，江西宜春 336300) 摘要：目的 观察紫杉醇对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法 取对数生长期人肝癌HepG2细胞，分 别置入 5、10、20nmo~L紫杉醇共同培养48h(实验组)，另设阴性对照组。采用 MTI法测定细胞增殖活性；Ho— echst33342荧光染色法观察紫杉醇处理后细胞形态的变化；DNA琼脂糖凝胶电泳检测 DNA梯状条带；免疫组织化 学法检测细胞中凋亡相关蛋白cFLIP、Survivin、Caspase-3的表达。结果 紫杉醇浓度分别为5、10、20nmoUL时，细 胞增殖活性分别为0．51±0．02、0．49±0．05、0．38±0．09，与阴性对照组 (0．61±0．07)比较P0．05或0．01；荧 光显微镜观察可见典型的细胞凋亡形态学改变，以20nmoUL紫杉醇作用最明显；DNA琼脂糖凝胶电泳显示，实验 组细胞均可见典型的 “梯状”条带；与阴性对照组 比较，实验组能显著抑制 cFLIP、Survivin蛋 白的表达，促进 Caspase-3蛋白的表达(P0．05或 0．01)。结论 紫杉醇可能通过下调 cFLIP、Survivin蛋 白的表达及上调 Caspase．3蛋白的表达诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。 关键词：肝肿瘤；紫杉醇；HepG2细胞；细胞凋亡 中图分类号：R735．7 文献标志码 ：B 文章编号：1002—266X(2011)37-0095-02 紫杉醇是二萜类生物碱化合物，对多种恶性肿 养4h后，平板离心机2000r／rain离心5rain，弃上 瘤具有较好的临床疗效。2010年6月 ～2011年6 清 160 l，加入低渗盐水200Ixl，同上离心洗涤2次 月，本研究观察了紫杉醇对人肝癌HepG2细胞增殖 后，弃上清200 l，加人无水乙醇200ill，反复吹吸 及凋亡的影响。现报告如下。 几次，待Fomanzan溶解后，在酶标仪 570nFIl处读取 1 材料与方法 OD值 。 1．1 材料 紫杉醇由四川太极制药有限公司提供， 1．2．3 细胞形态学观察 取人肝癌 HepG2细胞 1 分子量为853．92，使用时用0．9％氯化钠注射液稀 ×10个／ml，接种于 6孔培养板 中，孔 中预先放人 释至所需的药物浓度。HepG2细胞 由美 国典型物 盖玻片，每孔2ml，于37℃、5％ CO：的培养箱中培 种保藏中心提供。RPMI1640培养基为Hyclone公 养过夜后，将培养液吸出，分别加入终浓度为5、10、 司产品，小牛血清购 自杭州四季青公司。MrIT购 自 20nmol／L紫杉醇，阴性对照组加入含终浓度为 江苏碧云天生物技术研究所。免疫组化试剂盒购 自 0．1％DMSO的培养基。以上各组作用48h后，取 Santacruz公司。HHCP-O1CO 培养箱 ，上海一恒科 出盖玻片，PBS轻轻冲洗2次，4％多聚甲醛固定20 技有限公司生产。Bio．Rad550型酶标仪，美国生产。 min，晾干 ，加入 Hoehest33342(4 g／m1)，避光染色 1．2 方法 5min，用蒸馏水洗 3次。荧光显微镜激发，观察细 1．2．1 细胞传代培养 人肝癌 HepG2细胞接种于 胞形态 。 含 10％灭活小牛血清的新鲜 RPMI1640培养液中， 1．2．4 DNAladder条带的观察 取人肝癌 HepG2 37℃、5％CO 培养箱中，2～3d传代 1次。取对数 细胞 1X10。／mlHepG2细胞分别接种于 4个 5Oml 生长期 的细胞用于实验。 的培养瓶，1．5ml／瓶，待细胞贴壁后，分别加人上述 1．2．2 细胞增殖活性的检测 采用MTT法。取人 3个不同浓度的紫杉醇 1．5ml，对照组加入 1．5ml 肝癌 HepG2细胞 3X10 个／ml，接种于 96孔板内， 培养液，37oC、5％CO2