抗胰岛素样生长因子-Ⅱ单克隆抗体对胃癌细胞株BGC-823的抑制作用.pdfVIP

山东医药2011生筮 鲞箜 塑 抗胰岛素样生长因子一Ⅱ单克隆抗体对 胃癌 细胞株 BGC一823的抑制作用 阴秀丽 ，李 坤 ，徐昌青 ，陈 自平 (1山东大学医学院，济南250012；2山东省千佛山医院； 3山东省荣军总医院) 摘要 ：目的 探讨抗胰岛素样生长因子一Ⅱ(IGF—lI)单克隆抗体 (单抗)对胃癌细胞株 BGC一823的抑制作用。 方法 在体外培养人胃癌细胞株 BGC．823，实验组分别加入抗 IGF—I1单抗5、10、20 g／ml作用24、48h，对照组加 入二甲基亚砜 ，用噻唑蓝法检测两组细胞生长抑制情况；在显微镜 、透射电镜下观察细胞形态和超微结构，流式细 胞术检测细胞凋亡率。结果 不同浓度及作用时间抗IGF—lI单抗对 BGC一823细胞的抑制作用各异，显微镜及电镜 下可见细胞凋亡现象。与对照组比较 ，实验组细胞培养24、48h时的吸光度值及细胞凋亡率均有统计学差异 (P 0．05或 0．(】1)。结论 抗IGF—lI单抗对胃癌 BGC一823细胞有明显抑制作用 ，且呈一定的剂量、时间依赖性。 关键词：胃肿瘤 ；抗胰岛素样生长因子一Ⅱ；抗体，单克隆；细胞凋亡 中图分类号：R735．2 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)37-0075-02 近年研究发现，胰岛素样生长因子一Ⅱ(IGF—II) 1．2．3 细胞超微结构观察 用倒置显微镜观察细 与肿瘤关系密切…，有促进肿瘤细胞增殖、分化及 胞形态。细胞培养24h后，实验组分别加入 10、20 抗凋亡作用。以往研究发现，胃癌患者血清 IGF—U ml的抗 IGF—lI单抗，对照组不加；培养24、48h 明显升高，且其阳性表达与 胃癌细胞的生物学特性 后收集细胞，离心后制作电镜标本，观察细胞超微结 相关 ]。为探讨抗 IGF—II单克隆抗体 (单抗)对 胃 构 。 癌 BGC．823细胞的抑制作用，2008～2010年，我们 1．2．4 细胞凋亡检测 实验组分别加入 5、10、20 进行了相关研究。现报告如下。 g／ml的抗 IGF-II单抗，对照组不加；培养24、48h 1 材料与方法 后，调整细胞数为 1×10个／ml细胞悬液，于混匀 1．1 材料 人 胃癌细胞株BGC一823由中国医学科 状态下加70％乙醇固定，4cC过夜。染色前离心、弃 学研究院提供，抗 IGF一Ⅱ单抗购 自美 国Upstate公 去乙醇，用PBS液洗涤2次去除固定液，加 1％RNA 司。 酶溶液200Ixl，37℃水浴 30rain后加 PI染色液200 1．2 方法 混匀，4qC避光 30min，经350目尼龙网过滤后上 1．2．1 细胞培养 将 BGC一823细胞复苏后移入培 机分析。 养瓶 ，37℃、5％CO：培养，48h后更换培养液；细胞 1．3 统计学方法 采用SAS6．12统计软件，结果 贴壁80％时再次传代培养，更换培养液，供实验用。 以 ±s表示，计量资料比较采用q检验。P≤0．05 1．2．2 细胞生长抑制率(IR)检测 将对数生长期 为差异有统计学意义。 BGC．823细胞制成2×10个／ml细胞悬液，接种于 2 结果 96孔培养板，每孔200Ixl；设空 白培养液为对照组， 2．1 两组 BGC．823细胞抑制作用比较 见表 1。 37℃、5％CO：培养箱中过夜培养。实验组分别加 表 1 两组BGC-823细胞抑制作用比较 (n=4) 入终浓度5、10、2O g／ml的抗 IGF一Ⅱ单抗200Ixl， 对照组加入等体积二甲基亚砜 (DMSO)。每组均设 4个复孔，分别培养24、48h，培养终止前4h，每孔 加入噻唑蓝 10Ixl；对照组终止培养时，每孔加入 DMSO100 ；均置摇床低速微振荡20min，在波长