高通量筛选法在测定腈水解酶活性中的应用.pdfVIP

第 34卷 第 6期 (总第 201期) 三 峡 环 境 与 生 态 Vo1．34 No．6(Sum．No．201) 2012年 11月 EnvironmentandEcologyintheThreeGorges NOV．2O12 高通量筛选法在测定腈水解酶活性中的应用 张淑蓉 ，刘建萍 ，梁国娟 (1．重庆医科大学药学院，重庆 400016；2．重庆市万州区环境监测站 ，重庆 404020) 摘 要：腈水解酶可将 3一氰基吡啶直接水解生成烟酸，应用高通量筛选法从 3O种腈水解酶中筛选出 131粗 酶作为催化剂，测得该酶的酶活 17．6U／mL，比酶活 35．2U／mg，转化率最高。在温度为 3O℃，pH为 8．0，底物质 量浓度为 8～10g／L时，腈水解酶 131能将 3一氰基吡啶完全转化为烟酸 ，产物纯品收率为 85 左右 。并用质谱和 核磁验证产物结构的正确性。为建立烟酸制备的绿色工艺提供了新的思路。 关键词：高通量筛选；腈水解酶；烟酸；活性 中图分类号 ：X83 文献标识码 ：A 文章编号 ：1674—2842(2012)06—0023—03 ApplicationofHighThroughputScreeningin the Determination ofNitrilaseActivity ZHANGShurong ，LIUJianping ，LIANG Guojuan (1．PharmaceuticalCollegeofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016 2．WanzhouEnvironmentalMonitoringStation，Chongqing404020) Abstract：Nicotinicacidcanbeproducedthroughdirecthydrolysisof3-cyanopyridinebyNitrilase．Byhighthrough— putscreening，Nitrilase131wasselectedfrom 30nitrilasesasanapplicablecatalyst．Itwasmeasuredthatthecon— versionratewasthehighestwhenitsenzymeactivitywas17．6U／mLanditsspecificactivitywas35．2U／mg．Ata temperatureof3O~C andapH valueof8．0，whentheinitialsubstrateconcentrationwas8～ 10g ·L ，3-cyan— opyridinecouldbetransformedintonicotinicacidcompletelywithapureproductyieldabout85％．Theproduct structurewasvalidatedbyMSandNMR．Thisstudyprovidesanew ideaforthegreentechnologyofnicotinicacid’S preparation． Keywords：highthroughputscreening；nitrilase；Nicotinicacid；activity 腈是一类重要 的化合物 ，它的水解反应被广泛 水解反应生成相应的羧酸L3_6_。目前报道 的腈水解 应用于氨基酸、酰胺 、羧酸及其衍生物的合成口]，在 酶大都来 自微生物 7『]，虽然微生物种类繁多，但仍 有机合成中占有极其重要 的地位 。腈水解 的方法主 然不能满足 日益增长的工业需求 ，有许多具有高催 要有化学水解法和生物转化法。腈的化学水解 因其