康氏木霉PLA2基因的生物学功能及诱导玉米抗弯孢霉叶斑病作用.pdfVIP

卷第 剐 【. ;. 上 海交通 大学学报农 业科 学版 . 】 年 月 文章编号: ?? : . /. . . .康氏木霉基因的生物学功能及诱导 玉米抗弯孢霉叶斑病作用 许志华 ~,余传金 ,傅科鹤 ,林振亚 ,荆 晶 ,王 兵 ,董金皋。,陈 捷 .国家玉米产业技术体系研发中心,北京 ; .上海交通大学农业与生物学院,农业部都市农业南方 重点开放实验室,上海 ; .河北农业大学 真菌毒素实验室,河北保定 摘 要:本研究从康氏木霉的中克隆了。基因,然后用 。敲除突变株为材料在 玉米接弯孢霉叶斑病菌的条件下研究此基因的生物学功能。敲除突变株所分泌的胞 外几丁质酶和 , 一半乳糖苷酶的酶活要比野生型低。玉米接种弯孢霉叶斑病菌条件下,突变株 的生防实验表明其具有较好的诱抗作用。此基因大肠杆菌表达产物在离体玉米叶片上同对照相比 产生更大的叶斑。 基因在木霉对抗弯孢霉叶斑病菌同玉米互作可能是一种负调控方式,要对 此基因与玉米的非亲和互作还需对此基因互补进行功能验证。 关键词: 基因; 敲除突变株;弯孢霉叶斑病;诱导抗性 中图分类号: .文献标识码:『 . ? , , ,? , , ?, ~, 。,?。,,。 ., ,, ; ., ,, , ; .,, ,:, ., 一. ?, . , . ,. ? 收稿日期:? 基金项目:现代农业产业技术体系 ;国家自然科学基金项目 ;上海市科委重点攻关项日作者简介:许志华 一 ,女,硕士研究生,研究方向:植物学,: . ; 余传金 一 为共同第一作者,男,博士研究生,研究方向:植物学,:. ; 陈 捷 为奉文通讯作者,男,教授,博士生导师,研究方向:植物病害生物防治,: .. 第 期 许志华,等:康氏木霉 基因的生物学功能及诱导玉米抗弯孢霉叶癍病作用研究 .. .: ; 一 ; ;木霉是对多种病原菌具有拮抗 糖,琼脂 ,最后定容 摇匀分装于小瓶 ; 作用的一类生防菌,其分布的生态系统非常广泛,是 发酵用培养液 几丁质 . ,七水硫酸亚铁 由许多的根际丝状真菌组成,按照经典分类系统其 .,硝酸铵 . ,磷酸二氢钾 . ,七水硫酸 属于半知菌亚门、丝孢纲 镁 .,最后加入 至。 、丝孢目 、丝孢 . 康氏木霉基因的克隆 科 。木霉菌与植物作用的机制 根据敲除子的序列进行基因 ,从而得 模型也相继被学者提出,其中 口 初步阐述 到了在上基因组的序列,分析之后设计引物从 了 .一 与植物的机理,其中包括 的序列中克隆 。 抑制病原菌分泌侵染植物相关酶的活性以及对病原 . 木霉菌胞外几丁质酶和 , 葡聚糖酶活性 的测定 菌在植物体或者种子附近萌发所需营养的竞争,但 是这些模型都非常局限,不具备通用性。人们研究 使用无菌 悬浮培养一周的野生型木霉 发现木霉在实际应用的过程中,尤其处理玉米过程 菌和敲除菌 的孢子,血球计数板 中发现木霉与玉米存在非常复杂的相互作用关系。 确定孢子数并调制使二者浓度一致,然后等量接到 发酵培养基中,/ , ℃发酵培养 ,然后 有些木霉与玉米品种互作表现出促进生长或者提高 抗病能力的正向调控,但有的组合则是抑制玉米生 / ,离心 ,分光光度计测量上清中 长负向调控抗病,人们通过一系列的研究表明此特 胞外几丁质酶和 , 葡聚糖酶的活性,重复 性是由显性基因所调控¨ 。因此鉴定调控木霉菌 次 。规定一个酶活单位 /为:每分钟每毫 中与玉米互作的相关基因,对于更好地利用木霉菌 克蛋白水解底物产生 微摩尔葡萄糖所需酶量。 防治作物病害以及评估和提前预防病害具有重要 . 敲除子诱导玉米抗弯孢霉叶斑病菌的效应 意义。 野生型与敲除子 △ 在上 本实验室在前期工作中以 .为 培养 周后,用无菌 配制孢子悬液,调制其 出发菌采用 方法 限制性内切酶介导的基因 浓度为 / ,实验的玉米为 ~ 叶龄,分别将 整合 ,从阳性转化子中克隆了一个相似于乙酰水解 和 △ 等浓度/孢子悬液 酶 家族成员的基因 。为了更进一步验针刺接种于玉米根系。同理,也将生长 周的 证该基因的功能,采用原生质体融合的方法,经过一 . 制成 / 孢悬液备用。实验的 种组 系列的初筛复筛及分子鉴定后得到一株敲除子合: 工 用 处理玉米根 之后将 /△ 。本文着重对敲除突变株的生物学特性 . 孢子悬液喷洒于该组的玉米叶片上;以及诱抗机理进行初步的探索,为进一步明确此基 用处理玉米根 之后将 /. 孢 因在木霉的生防机理中的分子机制奠定基础。 子悬液喷洒于该组的玉米叶片上;此处理同Ⅱ 组相同,只是玉米根先用 △ 孢子悬液预 处理 。每个处理 盆 ~ 叶期玉米,每盆内 材料与方法 颗生长相当的