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实验八 植物激素对植物形态建成的作用 【实验原理】 植物各器官的分化，首先是细胞的极化过程。植物体的每一个细胞都由受精卵分裂而来，即使高度分化的细胞也保留着遗传上的全能性，即在每一个细胞中包含着产生一个完整有机体的全部基因。 早在五十年代Skoog和崔瀓就已发现在烟草组织培养中，激动素和生长素在愈伤组织产生和分化中的相互作用。愈伤组织的大量产生需要有生长素和激动素。 生长素／激动素的比率高时，诱导产生根；生长素／激动素的比率低时，产生芽；在二者的比例居间时，愈伤组织占优势。 【实验目的】 理解植物激素对植物形态建成作用的重要性。 了解生长素／激动素比率的变化是决定诱导根、芽和愈伤组织形成的关键因素。 【实验材料】 生长健壮的烟草植株 【实验器材】 ⑴烧杯; ⑵搅棒; ⑶容量瓶; ⑷量筒; ⑸移液管; ⑹三角瓶; ⑺培养皿; ⑻超净工作台; ⑼培养室; ⑽冰箱; ⑾天平; ⑿高压灭菌锅; ⒀镊子; ⒁手术刀; ⒂手术剪; ⒃酒精灯; ⒄滤纸; ⒅铝箔。 【实验步骤】 (1) 愈伤组织诱导培养基（RM-1965） ① 称取琼脂10克，放入盛有约500mL蒸馏水的量程为1升的烧杯中，加热溶解（注意加水体积不要太多）。 ② 逐一加入(1) ~ (10)母液各10mL，边加边搅拌。 ③ 称取蔗糖30克加入烧杯中，搅拌均匀后加蒸馏水至1000mL。 ④ 用1M NaOH调pH为5.6-6.0。 ⑤ 把溶液装入三角瓶，每瓶25mL，于高压灭菌锅中1.05MPa(121℃)蒸气压力下灭菌15~20分钟，冷却后备用。 (2) 分化培养基 除生长素和激动素按后面浓度比例加入外，其它与RM-1965培养基中成份相同。共分六个处理，各处理重复四个以上。调pH至5.6-6.0之间，分装及灭菌与诱导培养基相同。 愈伤组织的诱导 (1) 茎段的消毒：取高约2尺的烟草植株地上部分，去顶，去叶，切成约7cm长的小段，用70％乙醇浸泡3min，无菌水冲洗一遍后，用10％安替福民浸泡5min，更换新的安替福民溶液再浸泡5min，然后用无菌水冲洗5次，置无菌培养皿中备用。 (2) 烟草髓的制备：在无菌条件下于超净工作台上，用最小号打孔器小心的将烟草髓组织取出 (可用小玻璃棒退出)。然后用手术刀将髓两端切去各0.5cm，再将中间一段切成2mm左右的小圆片(注意烟草形态的上下方向)。 (3) 接种：用长柄镊子向每个三角瓶中接入髓片三个，使形态学的下端朝下，用铝箔纸包上瓶口。 (4) 培养：置培养室中，28℃人工光照条件下培养。 器官的再分化 在无菌条件下将诱导出(约3~4周)的烟草愈伤组织，用手术刀小心的切成2×2×2mm3的小块，用长柄镊子转接于分化培养基中，置28℃培养室中人工光照培养，记录生长变化情况，五周后总结观察结果。 结果记录 (1) 愈伤组织出现的时间。 (2) 芽和根出现的时间。 (3) 统计根、芽及全苗数。 【注意事项】 1. 整个实验过程都需无菌操作。 2. 接种时烟草叶片的形态学下端朝下放置在培养基上。 【思考与作业】 1. 培养基中加入的蔗糖对愈伤组织的生长起什么作用？ 2. 实验中除培养基需高压灭菌外，还有哪些实验用品需无菌处理？ 3. 不同浓度比例的IAA和激动素对愈伤组织的诱导及其分化有何影响？ 4. 实验材料烟草髓片接入瓶中时，要求形态学下端朝下，为什么？ * * 植物生物学实验-植物生理部分 2 0.02 6 0.02 2 5 0.2 2 4 0 2 3 0.2 0 2 0 0 1 激动素浓度（mg/mL） 生长素浓度（mg/mL） 编号