团头鲂微卫星多重PCR体系的建立及应用.pdfVIP

第28卷第5期 大连海洋大学学报 V01．28No．5 201 OFDAUANOCEANUNIVERSnY Oct．2013 3年10月 JOURNAL 团头鲂微卫星多重PCR体系的建立及应用 罗伟1，高泽霞1，曾聪1，邓伟1，易少奎1，钱雪桥2，王卫民1 (1．华中农业大学水产学院农业动物遗传育种与繁育教育部重点实验室农业部淡水生物繁育重点实验室，湖北武汉430070； 2．广东海大集团股份有限公司，广东广州511400) amblycephata20个微卫星标记组合建立了6个微卫星多重PCR体系，包括 摘要：利用团头鲂Megalobrama 2个四重PCR和4个三重PCR体系。利用构建的6个微卫星多重PCR体系评估了团头鲂淤泥湖群体的遗传 多样性，结果表明，平均等位基因数为5．8，平均期望杂合度和平均观测杂合度分别为0．72和0．77，平均 选出的多重PCR组合为团头鲂的群体遗传结构分析和亲子鉴定等研究提供了技术基础。 关键词：团头鲂；微卫星；多重PCR；遗传多样性 中图分类号：$917．4 文献标志码：A 微卫星DNA(mierosatellite)由2—6个核苷酸，m。俗称武昌鱼，是中国特有的经济名贵鱼类之 为核心序列的串联重复而成，其数量巨大，随机分 一，原产于长江中下游的通江湖泊，由于其生长 布于整个基因组。自20世纪80年代被发现以快、抗病力强、味道优美、营养丰富，自20世纪 来[1]，微卫星标记以其分布广泛、共显性遗传、 60年代人工繁殖取得成功以来，在中国各地得到 多态性高等特点，被广泛应用于个体鉴定、群体遗 广泛推广，目前团头鲂已成为了中国最重要的池塘 传学，以及进化和基因组作图等领域悼‘4J。目前， 混养鱼类之一。几十年来，由于原产地野生资源被 应用微卫星标记对动植物进行群体遗传和亲子鉴定 过度捕捞以及各地广泛移植和人工近亲繁殖，团头 等的研究，通常需要对多个群体大量个体的多个微 鲂的种质资源不断衰退和混杂u4|。为了保护团头 卫星位点进行PCR扩增和检测，操作繁琐、工作 鲂野生种质资源并获得更好的良种，国家现代农业 产业技术体系——大宗淡水鱼类产业技术研发中心 量大、试验成本高。1988年，Chamberlian等b1首 次提出在同一PCR反应体系中加入多对微卫星引 启动了“团头鲂种质资源与育种”项目。为实现 物，同时进行多个目标序列的扩增，即多重PCR 团头鲂分子育种，目前已有不少有关其微卫星标记 PCR)。该技术可一次扩增多个靶位点，开发的报道[15—8|，但尚未见其多重PCR体系的开 (multiplex 同时实现多个位点的基因型鉴别，使基因分型变得 发。本研究中，根据本课题组开发的多态性微卫星 简捷，提高了检验效率，并且多重PCR技术同时 标记，作者优化筛选了团头鲂多重微卫星PCR扩 扩增两条以上的靶基因片断，出现假阳性的概率较 增体系，并用于评估了团头鲂淤泥湖野生群体的遗 常规PCR小得多，有效地减少了假阳性现象。目 传多样性。 前，多重PCR技术已经在多个物种的群体遗传多 1材料与方法 样性分析[6-7]、谱系分析[8-9]和DNA检测n叫中被 广泛应用。在水产领域，对棕鳟H1|、大菱鲆¨21和1．1材料 中国明对虾[1等已建立了多重PCR体系。 2009年6月，采集团头鲂湖北公安淤泥湖野 团头鲂Megalobramaamblycephala隶属于鲤形 生群体，随机选取40尾，剪取鳍条，用体积分数 目Cypriniformes、鲤科Cyprinidae、鲂属Megalobra一 为95％的乙醇固定，于一20℃下