痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究.pdfVIP

江 西医学院学报 2008年第 48卷第 6期 ActaAcademiaeMedicinaediangxi2008。Vol48，No6 痰耐药结核分枝杆菌 rpoB基因的快速检测 及利福平耐药机制研究 杨 松 ，钟 敏 ，张耀亭 ，王易伟。 (1．中国人民解放军第 175医院肺科 ，福建 漳州 363000； 2．重庆市结核基 因诊断 中心检验科，重庆 400020) 摘要 ：目的 快速检测痰耐药结核分枝杆菌 rpoB基因，了解利福平耐药的分予机制。方法 根据结核分枝杆菌 rpoB基 因的耐利福平决定区设计引物 ．用 PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增 rpoB基 因片段 ，对 扩增获得 的rpoB基 因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、单耐利福平 、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间 的基 因序列差异。结果 于6h内从耐药肺结核痰 中快速检测到 rpoB 因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离 菌株均检测有 rpoB基因点突变，突变位点主要为 531、516或 526常见舒码子，且绝大多数为单碱基突变，发现 1例 MDR—TB出现 479位和 531位密码子 同时突变 。敏感株和标准株_尢基 因突变 。结论 PCR及序列分析方法可快 速 、准确检测结核分枝杆菌 rpoB基 岗及其突变 ，结核分枝杆菌埘利福平的耐药性与 rpoB基因点突变有关 。 关键词 ：耐药结核分枝杆菌；利福平；rpoB基因；聚合酶链式反应 中图分类号 ：R520．4；R378．911 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—2294f2008)06—0063—04 RapidDetection ofrpoB GeneofResistantM ycobacterium Tuberculosisin Sputum andRifampin—resistantM echanism YANG Song ，ZHONG M in。，ZHANG Yao-ting ，W ANG Yi—wei (1．DepartmentofPneumology，175 HospitaloftheChinesePeople’ LiberationArmy，Zhangzhou363000，China；2．DepartmentofClinicalLaboratories， CenterofTuberculosis，GeneDiagnosisofChongqing，Chongqing400020，China) ABSTRACT：Objective TorapidlydetectrpoBgeneofMycobacterium tuberculosisinsputum andtoexplorerifampin(RIF)一resistantmechanism．M ethods rpoB fragmentwasamplifiedfrom M ．tuberculosisstrainsfrom sputum specimensofdrug—resistantinpatientsorclinicisolatesby PCR with apairofprimersdesignedaccording torifampin resistance—determiningregion ． The fragmentsofrpoBweresequenced．ThedifferenceofrpoB genefragmentssequencesofclinicali— solatesamongmultidrug—resistant，alldrugs—resistant，singleRIF—resistant，alldrugs—susceptiblei— solatesofM ．tuberculosis，orstandardstrainwerecompared．Results W it