食品中3种致病菌多重PCR检测体系的建立及初步应用.pdfVIP

236 2011，Vo1．32，No．16 寅 品科 学 ※分析检测 食品中3种致病菌多重PCR检测体系的 建立及初步应用 钱志伟 1，孙新城2 (1．河南农业职业学院食品科学系，河南 郑州 451450；2．郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南 郑州 450002) 摘 要 ：目的：建立同步速测食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌的多重聚合酶链式反 应(polymerasechainreaction，PCR)方法。方法：利用基因组比对法寻找3种致病菌的特异性序列——沙门氏菌的 invA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和单增李斯特菌的p 基因，运用PrimerPremier5．0分别设计3对片段大小 不同的特异性引物；通过优化反应体系，建立3种致病菌的多重PCR检测体系。结果：建立的多重PCR方法灵 敏度测试结果分别为7．6、3．8、5．1pg]L，在此灵敏度下可以扩增出全部特异性引物条带，验证性实验结果出现 相应的 目的条带且未发生交叉影响。结论：初步建立能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中沙门菌、金黄色 葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌的三重 PCR方法。 关键词：食源性致病菌；多重聚合酶链式反应(PcR)；沙门氏菌；金黄色葡萄球菌；单核细胞增生性李斯特菌； 食品检测 EstablishmentandApplicationofaMultiplexPCRAssayforDetectionofThreePathogenicBacteriainFood QIANZhi-wei，SUNXin—cheng (1．DepartmentofFoodScience，HenanVocationalCollegeofAgriculture，Zhengzhou 451450，China： 2．SchoolofFoodandBiologicalEngineering，ZhengzhouUniversityofLightIndustry，Zhengzhou 450002，China) Abstract：Objective：Todeveloparapidmultiplexpolymerasechainreaction(m-PCR)assayforsimultaneousdetectionof Salmonellaspp．．StaphylococcusaureusnadListeriamonocytogenesinf0Od．Methods：Thegenomicalignmentmehtod WaSused toidentifyspecificPCRtargetsequences．ThreepairsofspecificprimersweredesignedwithPrimerPremier5．0accordingtOthe nivasiveproteingene(invA)ofSalmo nella，thenucgeneofStaph)，lococcusaureusnadhteprsgeneofListeriamonocytogen． MultiplexPCRWaSestablishedbyoptimizingthereactionsystem．Results：ThesensitivityofhtemultiplexPCRmehtodWaS 7．6pg／~LforSalmonelllaspp．，3．8pg／pLforSatphylococcusaureBs，nad5．1pg／pLforListeriamo nocytogenes．Allspecific primerswereamplified，andhteircorrespondingstripswereobservedinvalidationexperimentswi~outcrossreactivity． Conclusions：AtriplePCRaSsayhasbeenestablishedforthesimultna eous，sample，rapidnadsensitivedetcetionofSalmonelal