抗旱、耐盐基因P5CS植物表达双元载体的构建.pdfVIP

- C T ● ligRiCULTURAE 华北农学报 ·2008，23(6)：l1．14 BORHtl—SIHICli 抗旱、耐盐基 因P5CS植物表达双元载体的构建 程继东 2，安玉麟 ，孙瑞芬 (1．内蒙古农牧业科学院生物技术 中心，内蒙古 呼和浩特 010031；2．内蒙古农业大学 农学院，内蒙古 呼、和浩特 010019) 摘要 ：以含有 的重组质粒 pBIP5CS．F129A为模板 ，通过 PCR的方法获得 了 目的基 因 cS(1905bp)并将其 克隆到pBS．T载体上。利用限制性核酸 内切酶 BarnHI和 SalI将 P5CS基因从克隆载体上消化下来，定向插入到无 GUS基 因植物表达 载体 pCHF3的 CaMV35S启 动子 和 NOS终止子之 间。通过冻 融法将 此表达载体导入农杆菌 LBA441M 中，经 PCR鉴定表 明，P5CS基 因植物表达双元载体构建成功 。 关键词 ：抗旱、耐盐基因； cs基因；克隆 ；植物表达载体 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2008)06—0011一o4 ConstructionofDroughtandSaltResis．ta_nceGeneP5CS inPlantExpressionBinaryVector cHENGJi—dong’。AN Yu—lin ．SUN Rui—fen (1．BiotechnologyResearchCenter，InnerMongoliaAcademyofAgriculture andAnimalHusbandrySciences，Huhhot 010031，China；2．CollegeofAgronomy，InnerMongolia AgriculturalUniversity，Huhhot 010019，China) Abstract：ThegeneP5CS 1905bp)wasamplifiedviaPCRusingpBIPSCSF·129Aplasmidastemplateandcloned intopBS-Tvector．TheBarnHI／SalIfragmentfromtherecombinantplasmidpBS—T／ cSwasligateddirectivelybe— tweenCaMV35SpromotorandNOSterminateroftheexpressionvectorpCHF3withoutGUS gene．Theplantexpression vectorpCHF3／P5CSwastransferedintoAgrobacteriumtumefaciemsstrainLBA4404byfreeze-thawmethod，andtheex— pressionbinaryplasmidwasfurtheridentifiedbyPCR．TheresultsshowedthatpCHF3／P5CS vectorwasconstructedsac— cessfully． Keywords：Drought，saltresistancegene；P5CS gene；Plantexpressionvector 采用常规育种手段进行抗旱、耐盐新品种选育， 米 、黑麦 、大豆 、拟南芥、苜蓿等克隆出了多个脯氨酸 往往会由于不 良性状的伴随导入 以及转育周期的延 合成酶或与之相关的基因，即脯氨酸合成酶基因族。 长而达不到预期 目的。通过基因工程手段，将外源 在胁迫条件下，由谷氨酸合成脯氨酸在植物脯氨酸 抗旱 、耐盐基因导人作物体内并使之表达 ，是一条行 合成 的2条途径 中占主导地位 ，脯氨酸合成发生在 之有效 的育种途径。研究表 明，脯氨酸 (Proline)是 细胞质 中¨～6J。 植物 中主要的渗透调节物质之一 ，它不仅是生物大 PSCS(△ ．二氢吡咯．