一种改良的提取草莓属叶片总RNA的方法.pdfVIP

江苏农业学报(JiangsuI，．ofAgr．Sci．)，2008，24(6)：875～877 875 一 种改良的提取草莓属叶片总 RNA的方法 蔡斌华 ， 张计育 ， 高志红 ， 渠慎春 ，佟兆国 ，靡 林 ，乔玉山 ， 章 镇 (1．南京农业大学园艺学院，江苏 南京 210095；2．江苏省丘陵地区镇江农业科学研究所 ，江苏 句容 212400) 摘要 ： 探索一种新的适合草莓属 (Fragariaspp．)组培苗、大 田苗叶片总RNA的快速高效提取方法。试验以 草莓叶片为材料 ，用改进的CTAB法对其 RNA进行提取 ，并对提取的RNA进行了电泳检测 、含量测定和 RT—PCR 检测。结果表明：用该RNA提取方法提取的RNA具有28SrRNA、18SrRNA和5．8SrRNA3条清晰的条带，且无 降解。OD：／OD 在 1．83至2．14之间，具有较高的纯度 ，且含量较高。用该 RNA提取方法提取的RNA逆转录成 cDNA，经PCR扩增出现清晰的条带，说明该 RNA提取方法提取的RNA可以满足进一步分子生物学试验的要求。 关键词： 草莓属；总RNA；提取方法 中图分类号： Q503 文献标识码： A 文章编号 ： 1000-4440(2008)06-0875—03 AnImprovedMethodforIsolationofTotalRNA from theLeavesofFragaria spp· CAIBin—hua， ZHANG Ji—yu， GAO Zhihong， QU Shen—chun， TONGZhao—guo， MILin， QIAOYu—shan， ZHANGZhen (1．CollegeofHorticulture，Na ngAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China；2．ZhenjiangInstituteofAgriculturalSciencesoftheNing—zhenrally District，Jurong212400，China) Abstract： AfastandefficientmethodforisolationoftotalRNAfromtheleavesofstrawberry(Fragariaspp．)in vitroandfieldwasdevelopedintheexperiment．TheRNA samplesoftheleavesofstrawberrywereisolatedbyimproved CTAB method．andthepurityandquantityofeachRNA obtainedwasevaluatedbyagarosegelelectrophoresis，UV scan— ningandRT—PCRanalysis．ThetotalRNA ofstrawberryleavesextractedbythismethodshowedclearbandsof28SrRNA、 18SrRNA and5．8SrRNA，andthevaluesofOD26o／OD28owerebetween1．83and2．14．ThecDNA reverselytranscrip— tedrfom theextractedRNA exhibitedclearbandbyRT—PCR，whichmeantthatthequalityandpurityoftheRNA could meetthedemandsofmolecularbiologyexperiment． Keywords： Fragariaspp．；totalRNA；extractionmethod 能够提取高质量的RNA是进行 cDNA文库构 或应用商品化的Trizol等各类试剂盒。由于植物体 建、基因克隆、基因表达分析、转基因植株鉴定、植物 内所含的物质成分差异较大，RNA的提取方法差异 病毒检测等分子生物学研究的基础。 目前用于植物 也很大 J。草莓是一种蔷薇科草莓属 (Fragaria 细胞总RNA提取的方法很多，主要有苯酚法 、氯 sp