猪SelS基因启动子区的克隆及序列分析.pdfVIP

畜牧兽医学报 2011，42(6)：759—764 ActaVeterinariaetZootechnica Sinic0 猪 SelS基 因启动子区的克隆及序列分析 张宁波 ，井文倩 。，李 奎H (1．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 动物营养学国家重点实验室 ，北京 100193； 2．临沂师范学院生命科学学院，临沂 276005) 摘 要：本研究旨在克隆和分析猪硒蛋 白S基因(SelenoproteinS，SelS)启动子序列，并初步探讨潜在转录因子结 合位点对其表达的影响。通过 SON-PCR技术克隆猪 SelS基因启动子序列 ，利用Prorll。terScan、Promoter2 ． 0等 在线工具预测其启动子特征，利用细菌脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)刺激 PK15细胞，研究 NF-kappaB转录因 子对猪SelS基因启动子活性的影响。试验获得了猪SelS基因约3kb的启动子序列，部分序列比对发现猪、人、牛 和小 鼠物种间相似性仅 7 ～51 。预测猪 SelS基 因转录起始位点在一398bp．猪和人 SelS基因启动子存在系列 保守的转录因子结合位点，包括 NF-kappaB、CCAATbox、SP1、USF等 。但均未发现典型的TATAbox。细胞试验 表明，NF-kappaB转录因子可以上调猪 SelS基 因的表达 。结果提示 ，物种 间SelS基 因启动子相似性较低 ，但猪和 人 SelS基因的转录因子非常保守，IPS诱导试验提示，猪 SelS基因表达可能受NFkappaB转录因子的调控。 关键词 ：sONPCR；猪 ；SelS基 因；启动子 ；序列分析 中图分类号 ：$828；Q523．8 文献标识码 ：A 文章编号 2011)06—0759—06 CloningandSequenceAnalysisofthePromoterRegionofPorcineSelSGene ZHANG Ning—bo ，JING Wen-qian～，LIKui (1．TheStateKeyLaboratoryforAnimalNutrition，InstituteofAnimalScience， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China； 2．CollegeofLifeScience，LinyiNormalUniversity，Linyi276005，China) Abstract：TheaimsofthisstudyweretocloneandanalyzethepromotersequenceofporcineSelS gene，andpreliminaryinvestigatetheeffectoftranscriptionfactorsbindingsitesontheexpression ofporcineSelSgene．ThepromotersequenceofporcineSelSgenewasclonedusingSON—PCR， thecharacterizationofthispromoterwaspredictedusingonlinetoolssuchasPromoterScanand Promoter2．0．TheeffectofNF—kappaBonthepromoteractivitywasdetectedinPK15cellsafter LPSstimulation．Anapproximate3kbpromotersequencewasacquiredandthehomologyofpar— tim promotersequencewasonly 7 一5l among fourspecies including p