猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达及在ELISA中的初步应用.pdfVIP

畜牧兽 医学报 2011，42(6)：808—814 Act0VeterinariaetZootechnicaSinica 猪圆环病毒 2型Cap蛋 白的表达及在 ELISA中的初步应用 赵 玲 ，朱 玲 ，郭万柱，徐志文，漆信桥 ，李凤勤 (四川农业大学动物生物技术中心，雅安 625014) 摘 要：本研究旨在建立 以PCV2Cap蛋 白为包被抗原的间接 ELISA检测方法，构建猪圆环病毒 2型 (PCV2) ORF2基 因原核表达质粒 pET32a—ORF2并转化至 Rosetta菌，在 1．0mmol·I IPTG和 37℃条件下诱导下，Cap 蛋 白获得高效表达，Westernblot检测证实其具有免疫反应活性，以纯化的蛋 白为抗原建立了检测猪圆环病毒 2型 抗体的间接 ELISA方法 。结果表明抗原最适包被浓度为 2．162／g ·mL ；血清最佳稀释度为 1：40；抗原最佳包 被条件为4℃过夜；最佳封闭条件为 1 BSA37。C1h；血清反应时间为 37℃30rain；酶标二抗最适作用时间为 37℃ 45rain；底物最佳反应条件为37。C显色 15rain。用该方法对 四川省 184份猪血清样 品进行检测 ，总阳性率为 8O．98 (149／184)，与商品化的PCV2ELISA试剂盒得到的结果基本一致 。本试验成功建立 了PCV2血清抗体间 接 EIISA方法 ，具有较高的敏感性和特异性，可用于大规模的血清学检测 。 关键词 ：圆环病毒 2型；Cap蛋 白；间接 EIIsA 中图分类号 ：$859．659．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：0366—6964(2011)06—080807 ProkaryoticExpressionofCapProteinofPorcineCircovirus Type2VirusandItsPrimaryApplication in ELISA ZHAO Ling，ZHU Ling ，GUOWan-zhu，XU Zhi—wen，QIXin-qiao，LIFeng-qin (AnimalBiotechnologyCenter。SichuanAgriculturalUniversity，YA ’a 625014，China) Abstract：ThisexperimentwasconductedtoestablishindirectELISA usingCapproteinofporcinecirco— virustype2 (PCV2)ascoatingantigen．TheRosettaE．coliwithrecombinantplasmidpET32a-ORF2 containPCV2ORF2genewasinducedby1．0mmol·L IPTG at37。C．TheindirectELISA fordetec— tingPCV2Capprotein antibodywasestablishedto determinetheimmunogenieityoftherecombinant proteinwhichwasprovedbyW esternblot．Theoptimum workingcircumstancesfortheELISA areas follows：optimalconcentrationofCapforcoatingwas2．16 g ·mL～ ；thedilutionofserum samplewas 1：40；theoptimalcoatingconditionofCapforELISA WaSincubatedat4。C overnight；thebestblocking conditionwasin1 BSA at37 。C for1h；thebestincubationperiodand temperaturefortheserum sampleandHRP—labeledrabbitanti—porcineIgGwas37。C for3O