根瘤农杆菌介导的水稻转基因方法的优化研究.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2012，40(7)：3867，3880 责任编辑 朱琼琼 责任校对 李岩 根瘤农杆菌介导的水稻转基因方法的优化研究 牟晨，金菁，石金磊 (复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室，植物科学研究所，生物化学系，生命科学学院，上海2oo433) 摘要 [目的]优化根瘤农杆茵介导的水稻转基因方法。[方法]通过对经典水稻转基因方法的优化和改进，高效获得转基 因水稻苗。 [结果]使用成熟胚 ，采取升汞灭茵，侵染时农杆菌的∞ 值为0．1时，转化效率最高，较原方法提高约23％。[结论]该研究为以根瘤农 杆菌介导的水稻转基 因研究提供了技术参考。 关键词 水稻；转基因；组织培养 中图分类号 $511 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2012)07—03867一O1 Optimization 0fAgrobacterium-mediatedTransformationM ethodforRice MOU Chenetal (StateKeyLaboratoryofGeneticEngineering，InstituteofPlantBiology，DepartmentofBiochemistry，SchoolofLifeSci— ences，FudanUniversity，Shanghai200433) Abstract [Objective]ThisstudyaimedtooptimizethemethodforAgrobacterium—medi~edtransformationinrice．[Method]Transgenicrice seedlingswereobtainedbyoptimizingandmodifyinghteclassicaltransfomrationmethods．[Result]Matureembryoswereadoptedandsteri— lizedbyHgC12．Trna sfomr ation efficiencyhadachievedthemaximum when ∞ 60owas0．10，whichhad increasedby23％ ，comparingwith previousmehtod．[Conclusion]ThesutdyprovidedatechnicalreferenceofrrelativeresearchesofAgrobacterium-medimedtransfomrationin rice． Keywords Rice；Transgene；Tissueculture 水稻具有基因组小 ，较易通过组织培养手段得到再生植 室内保存。 株等特点，因而成为植物研究重要的模式生物。同时，水稻 1．2 方法 又是世界上最重要的粮食作物之一 ，为全球近一半的人 口提 1．2．1 水稻胚的选择与消毒条件 的选择。选取成熟种子 供粮食。杂种优势的成功利用使得水稻产量大幅度提升，但 (去壳)与灌浆初期的种子分别分成2组，每组用次氯酸钠法 杂交育种周期长、稳定性差、可控性差，这些因素在很大程度 (70％乙醇浸泡 1min，灭菌水冲洗干净，再用2％次氯酸纳浸 上阻碍了水稻育种的发展 j。20世纪80年代产生的转基 泡20min，以灭菌水反复冲洗干净)或升汞法(0．1％升汞浸 因技术，可直接在基因水平改变植物的遗传物质，直接弥补 泡 15min，灭菌水清洗干净)消毒后 ，置于超净 台上晾干，然 了杂交育种在定向性和稳定性等方面的不足 J。许多学者 后将胚放置于愈伤诱导培养基 (4．4g／LMS+2．5mg／L 在水稻转基 因育种 的研究上做了大量工作并取得了不菲的 2，4-D+600mg／L干酪素 +30g／L蔗糖 +5g／L植物凝胶 ， 成绩 ，为水稻的遗传改 良做出了巨大贡献 。水稻转基因 KOH调至pH5．8，高压灭菌)上进行愈伤培养 ，28℃培养2 技术主要集中于抗虫、抗逆、抗除草剂、抗病和改 良品质等 5 周后统计出愈率。 个方面。