猪CRYAB基因原核表达载体的构建及表达条件的优化.pdfVIP

广东农业科学 2011年第 16期 127 猪CRYAB基因原核表达载体的构建及表达条件的优化 李 莉 一，童 雄 ，田 力 ，王 种 (1．华南农业大学动物科学学院／广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室 ，广东 广州 510642； 2．广州市技师学院畜牧兽医实训中心．广东 广州 510410) 摘 要 ：将猪 CRYAB基因cDNA连接到原核表达载体 pRSETA中，构建重组表达质粒 pRSETA—CRYAB，经酶切和测序鉴定 后 ，转入表达宿主大肠杆菌BL21进行诱导表达，SDS—PAGE电泳分析表明，如期获得了重组蛋 白的表达，其主要以包涵体的形式 存在，且最佳条件为诱导温度25％，时间 15h，IPTG浓度为0．2mmol／L。 关键词 ：CRYAB基因；原核表达 ；条件优化 中图分类号 ：$828；Q754 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—874X(2011)16—0127—40 Construction ofrecombinantprokaryoticvectorcontaining CRYAB genesofswineandtheoptimization expression lJJLiL2TONG Xiong。．TIAN Li．W‘ANG Chong ‘ , (1．CollegeofAnimalScience，SouthChinaAgriculturalUniversity／GuangdnagProvinciolKeyLaboratoryofAgro—animal GenomicsandMolecularBreeding,Gunagzhou510642，China；2．AnimalScienceandVeterinaryMedicine TrainingCentre，GuangzhouTechnicanCollege，Gunagzhou514010，China) Abstract：cDNA ofCRYAB geneofswinewasinsertedintopRSETA prokaryoticexpressionvector．Therecombinantplasmidnamed pRSETA—CRYABwasconstructed，andsecendlytransformedintoE．coliBL21(DE3)cellS．SDS—PAGEanalysisshowedthatpRSETA— CRYABproteinwassuccessfullyexpressedexistingintheinclusionbodyform，andtheoptimum conditionofrtheexpressionwas25％ ，15 h．0．2mmol／LIPTG． Keywords：CRYABgene；prokaryoticexpression；optimization CRYAB(crystallinalphaB)基因在各种哺乳动物 中 组蛋白的高效表达，以期为进一步研究该蛋白的功能奠定 基因序列保守 ，表达的蛋白也高度保守l1]。CRYAB是哺乳 基础。 动物 眼球 晶状体球蛋 白家族 中的重要一员 ，在人类先天 l 材料与方法 性 白内障等疾病方面被广泛研究。它还是热休克小蛋 白 家族 中fsHSP)的一员闭。热休克蛋 白(HSP)是生物细胞在受 1．1 试验材料 热 、生物应激 、理化因素等应激原刺激后所产生 的一类在 供试质粒 pMD18一