分离胶真空采血管在HBV-DNA实时荧光定量PCR分析中的应用.pdfVIP

’ 128’ MedicalLaboratoo,ScienceandClinics，2010，~o121。No．5 医学检验与临床 2010皇第 2l卷第5期 doi：10．3969／j．i8sn．1673—5013．2010．05．054 分离胶真空采血管在 HBV—DNA安时荧光定量 PeR分析中的应用 李朝晖 郑锦利 刘 洁 (福建 医科大学 附属 闽东医院检验科 ，福建福安 355000) 分离胶真空采血管 由于分离胶界于血清与血细胞之 间， 中并加入等量 DNA浓缩液 ，其余操作步聚按试剂说蹦书逢 可有效保护血清成分以及其分离血清效果优于无任何添加 行．两组检测结果(对数表示j如表3和图】所示。 剂的真空采血管的优点 ，广泛应用于血清生化学试验 、免疫 2 结 果 检测、药物检测等 ，但分离胶真空采血管用于 HBV—DNA实 时荧光定量 PCR检测是否适用 ，DonaldS．$-oung，MD．Phi3主 表 1 A组和 B组基本情况 编 、李艳等主译的 《分析前 因素对临床检验结果影响》中也未 提及 【因此我们用无任何添加剂的真空采血管 (A组)和分 离胶促凝剂真空采血管 (B组)采集 51名 门诊 患者空腹静脉 血样 ，然后对两种试管 HBV—DNA结果进行统计分析 ．以探 讨分离胶促凝管对 HBV—DNA实时荧光定量 PCR的检测是 表 2 A组和 B组配对 t检验 否有影 响和茌核酸检测 中应用价值。 1 材料和方法 1．1 材料 无任何添加剂 的真空采血管和分离胶真空采血 管 由福州长庚医疗器械有限公司生产 ；HBV—DNA荧光定量c 表 3 8份样本 不同处理 I-IBV—DNA的检谢结果 {对数表示) PCR检测试剂盒 由中山大学达安基 因股份有限公司生产 (批 号 2009007，有效期；基 因扩增仪为美 国 MJOPTI． CON I型实时荧光定量 PCR仪 (仪器产品编号 OP001261)； 湘仪 H一1650型高速离心机 ；使用的吸头、1．5ml离心管等耗 材均为一次性无菌高压物 品并经本实验室试剂质检合格 。 1．2 方法 1．2．1 采集本院门诊需做 HBV—DNA项 目检测 的患者静脉 血51人份 ，同一患者分别用无任何添加剂真空采血管(A组) 和分离胶促凝真空采血管 (B组)采血各 2ml，分离两组血清。 1．2．2 将 以上两组血清按 HBV—DNA荧光定量 PCR检测试 剂盒说明进行提取模板 DNA．空 白对照 、阴性质控 品、临界阳 性和强 阳性质控 品同时也检测 。扩增程序 ：93℃2rain；93℃ 45see-~55℃6Osec— lO个循环 ；93℃30sec~55℃45see~读板一 30．个循环 ；扩增结束。两组样本的检测在 同 批次上运行 ． 标准曲线的斜率及线性相关系数 r值达本实验室要求 ．临界 阳性和强阳性 质控 品均在控 ．两组 所测样本 阚值循环数 (thresholdcycle)CT值 (CT值大于或等于 3O的按 30计算)和 病毒载量(用 Logl0x对数表示 ，试剂盒线性范围2—8，低于线 性范围的结果 以2计算 ．高于线性范围的结果以8计算)用 图 1 8份样本不同处理的扩增数据 图形 SPSS13．0统计软件进行配对 t检验 ，分析结果如表 1和表 2 表 1所示AB组两组CT值和病毒载量的薹本情况；爱： 所示 。 所示 AB两组 CT值和病毒载量 的相关性显著 (午f关系数 ： 1．2．3 分离胶干扰实验 ：另外选取 A组 HBV—DNA浓度 别为0．990和 0．993)，两组 cT值和病毒载量检测结果经配 (IU／m1)O一7次方 的样本共 8份 ，将 1．5ml的离心管分为两 对 t检验无显著性差异 (t分别为 一1．975和 0．963．P±拿大予 组 ，其中一组离心管人为地加入少许分离胶 另一组离心管 0．