苦瓜水溶蛋白超薄等电聚焦电泳条件的优化.pdfVIP

第30卷 第9期 2011年9月 种 子 (Seed) Vo1．30 No．9 Sep． 2011 · 应用技术 · 苦瓜水溶蛋白超薄等电聚焦 电泳条件的优化 甄 鹏 ， 黄玉辉 ， 陈小凤 ， 黄如葵 - (1．广西大学农学院， 南宁530004； 2．广西农科院蔬菜所， 南宁530007； 3．广西作物遗传改 良生物技术重点实验室， 南宁530007) OptimizingtheConditionofUltra—thinIsoelectricFocusingElectrophoresisof Balsam waterSolubleProtein ZHEN Peng ，HUANG Yu-hui ，CHEN Xiao．feng HUANG Ru．kui，。 ， 摘要：为了建立等 电聚焦电泳进行苦瓜种子纯度及品种真实性 薄等电聚焦电泳技术体系，以期为同类研究提供技术 鉴定的技术体系，本试验利用苦瓜水溶蛋 白进行超薄等电聚焦 参考。 电泳条件优化，结果表明，在0．15mm超薄层凝胶和 1mm普通 1 材料与方法 凝胶对比中，超薄层凝胶电泳效果最好，基本无背景、条带多， 节省药品；1．5h是提取苦瓜水溶蛋白的最佳时间；10A／是最佳 1．1 供试材料 上样量；半粒种子加蛋 白提取液效果最好的是0．6ml。 苦瓜材料 MC26种子，由广西农业科学院蔬菜研 关键词 ： 苦瓜水溶蛋白；超薄层等电聚焦电泳；条件优化 究所提供。 中图分类号： S642．5 文献标志码 ：A 1．2 凝胶制备的优化 文章编号： 1001—4705(2011)09-0118-03 使用塑封膜替代聚酯胶片做胶。 1．2．1 超薄层凝胶的制备 蛋 白质是基因表达的产物，能够反映不同基因型 问的差异 。因此等电聚焦 电泳中，带有不同电荷 的蛋 采用薄片技术制备超薄聚丙烯酰胺凝胶 。。。凝 白质在电场作用下移动到其等电点处而聚成很窄的区 胶溶液含 1．6g尿素，0．16g牛磺酸，5．0ml聚丙烯酰 带，达到鉴定品种真实性和纯度的目的。基于此，B．J． 胺母液(T=6．8％，C=2．5％)，0．44ml两性 电解质 Radola发展出超薄等电聚焦电泳(UTLIEF)技术，此后 (Ampholine)pH3．5～10，l0 l四甲基乙二胺和 30z／l 在实际运用中不断改进形成的一种非常实用的电泳技 过硫酸铵 (10％)，室温下放置40min凝胶聚合完成。 术…。UTLIEF被认为是一种低成本、简便快速的品种 1．2．2 普通薄层凝胶的制备 ’ 真实性和纯度鉴定方法，已被写入 ISTA种子检验规 聚丙烯酰胺母液 (T=7．5％，C=3％)。凝胶含 程 ]。该技术在水稻、高粱、玉米等农作物 以及大 6g尿素，5ml母液，2Oml双蒸水，0．5ml两性电解质 白菜、西瓜、番茄等蔬菜 ，真实性和纯度鉴定上取得 (Ampholine)pH3．5—10，100x／l四甲基 乙二胺 ，30肛l 过硫酸铵。灌胶法 ¨做胶。 了较好的成果，而在苦瓜方面还未有报道。 UTLIEF是具有高分辨率的技术 J，运用该技术进 1．2．3 电 泳 行品种真实性鉴定，除了品种种子蛋 白特征谱带具有 电泳仪：北京六一仪器厂生产的DYCP一37B型多 差异外 ]，熟练地掌握 电泳技术也是鉴定成功的关 功能等电