梅花鹿过氧化氢酶基因的克隆与表达.pdfVIP

第４２卷 第１期 福州大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．４２Ｎｏ．１ ２０１４年２月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｕｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｆｅｂ．２０１４ ＤＯＩ：１０．７６３１／ｉｓｓｎ．１０００－２２４３．２０１４．０１．０１５４ 文章编号：１０００－２２４３（２０１４）０１－０１５４－０７ 梅花鹿过氧化氢酶基因的克隆与表达 １，３ １，２ １，２ 林 峻 ，林 娟 ，叶秀云 （１．福州大学生物科学与工程学院，福建 福州　３５０１１６；２．福州大学酶工程研究所，福建 福州　３５０１１６； ３．福州大学应用基因组学研究所，福建 福州　３５０１１６） 摘要：克隆得到梅花鹿过氧化氢酶基因序列，已提交Ｇｅｎｂａｎｋ登录（ＨＱ８７７６７４）．基因编码区全长１５８４ｂｐ，编 码５２７个氨基酸，理论计算分子量为６００２７．４Ｄａ，理论计算等电点为６．６７，预测蛋白质结构中不含有二硫键， 在蛋白质序列中，具有过氧化氢酶家族活性中心保守序列和过氧化氢酶家族亚铁血红素保守序列，其ＤＮＡ序 列和蛋白质序列均与Ｂｏｓｔａｕｒｕｓ来源过氧化氢酶的同源关系最为接近．使用ｐＰＩＣＺＣ质粒和毕赤酵母ＧＳ１１５菌 α －１ 株，成功异源表达该基因，对诱导表达的发酵上清液进行活性测定，酶活为４６３Ｕ·ｍＬ ． 关键词：梅花鹿；过氧化氢酶；克隆；表达 中图分类号：Ｑ７８　 文献标识码：Ａ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃａｔａｌａｓｅｆｒｏｍＣｅｒｖｕｓｎｉｐｐｏｎ １，３ １，２ １，２ ＬＩＮＪｕｎ ，ＬＩＮＪｕａｎ ，ＹＥＸｉｕ－ｙｕｎ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＦｕｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ３５０１１６，Ｃｈｉｎａ； ２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｎｚｙｍｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＦｕｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ３５０１１６，Ｃｈｉｎａ； ３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｐｐｌｉｅｄＧｅｎｏｍｉｃｓ，ＦｕｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ３５０１１６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＷｅｈａｖｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＣｅｒｖｕｓｎｉｐｐｏｎｃａｔａｌａｓｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ， ｗｈｉｃｈｈａｓｂｅｅｎｓｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＧｅｎｂａｎｋｕｎｄｅｒｔｈｅａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒＨＱ８７７６７４．Ｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆｔｈｉｓｇｅｎｅ ｉｓ１５８４ｂｐ，ｗｈｉｃｈｅｎｃｏｄｅｓ５２７ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ｔｈｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌＭＷｉｓ６００２７．４ＤａａｎｄｔｈｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｐＩ ｉｓ６．６７，ｔｈｅｒｅｉｓｎｏｄｉｓｕｌｆｉｄｅｂｏｎｄｉｎｔｈｉｓｐｒｏｔｅｉｎａｓｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，ｃａｔａｌａｓｅｐｒｏｘｉｍａｌａｃｔｉｖｅｓｉｔｅｓｉｇｎ ｔｕｒｅａｎｄｃａｔａｌａｓｅｐｒｏｘｉｍａｌｈｅｍｅ－ｌｉｇａｎｄｓｉｇｎｔｕｒｅｗｅｒｅｆｏｕｎｄ，ａｎｄ，ｂｏｔｈｔｈｅＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｐｒｏ ｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｉｓｗｏｒｋａｒｅｈｏ