基因诱捕技术及基因诱捕数据库.pdfVIP

维普资讯 生《命的化学)2007年27卷 1期 · 84 · CHEMISTRYOFLIFE2007，27(1) ●TechniquesandMethods 文章编号：1000—1336(2007)01—0085—03 基因诱捕技术及基因诱捕数据库 龚 强 胡维新 (中南大学生物科学与技术学院分子生物研究中心，长沙 410078) 摘要：基因诱捕 genetrap)~ dx鼠胚胎干细胞、报道载体(诱捕载体)建立的一种基因突变方法。诱捕载体在 整合位点利用 内源基 因调控元件模仿 内源基 因表达 ，使其表达终止 ，从而可 以阐明内源基 因的功能。由于诱捕 载体及其报道基因的特点，基因诱捕技术可用于高通量生产，便于小鼠基因功能的大规模研究．为各类疾病动 物模型的建立奠定 良好基础 关键词 ： 基 因诱捕 ； 基 因突变 ；ES细胞 ； 诱捕栽体 中图法分类号：Q71 基因诱捕fgenetrap1是基于小 鼠胚胎干细胞 调控元件的不同分为：增强子诱捕载体、启动子 fES细胞1和一类报道载体所建立的一种基因突变 诱捕载体 、基因诱捕载体及多fA)[po1y(A11诱捕载 技术 报道载体是将药物抗性基因和可检测的报 体等 。增强子诱捕载体 自身至少需要带有 1个启 道基因设计到普通质粒或病毒载体构建而成 抗 动子，当插入到顺式作用元件增强子附近时．载 性基因的表达便于阳性克隆的筛选 ：报道基因表 体能够利用 内源性增强子产生报道基因的表达 达产物可用以监测内源基因的表达 诱捕载体构 内源性基 因的表达 由于失去增强子 的调控而受到 建的特点是报道基因位于剪接受体位点下游．整 限制 启动子诱捕载体一般情况下 由 1个不含启 合到宿主细胞(ES细胞)基因组后 ，在 内源性功能 动子的报道基因和可选择标记——药物抗性基因 启动子的作用下通过 mRNA前体的剪接形成报道 组成 只有当载体插入到 内源性基因的外显子内 基因与 内源基因的融合转录 融合转录载体在插 部 ．形成外显子上游序列与报道基 因的融合转 入位点能够模仿 内源基因的表达 ．使得 内源基因 录 ．报道基 因在 内源性启动子的作用下得 以表 表达终止 ，达到突变 内源基因的 目的 ”【。载体的 达 ，内源基因失去启动子调控而表达受限 表达可以通过报道基因表达产物的活性进行检测 基因诱捕载体的特点是：无启动子的报道基 被诱捕 的基因则可通过质粒拯救(plasmidrescue)、 因上游有一个剪接受体位点 ．在 内源性基因的顺 基因组步移(genomicwalking)、cDNA5端快速扩增 式调控元件启动子、增强子的转录活性作用下， f5一RACE1、cDNA3端快速扩增 (3-RACE1，以及 通过mRNA前体的剪接．上游编码基因与报道基 直接 的基因测序等方法获得 鉴于ES细胞的特 因产生融合转录，内源性基因表达受阻，报道基 性。既可以对诱捕细胞克隆株进行体外遗传操作 ， 因以内源基因模式进行表达。基因诱捕通常用来 也可以将 ES细胞注射进胚泡诱导分化 ．研究诱捕 研究小 鼠体 内插入导致的突变 ，也可发现、定性 基因在小鼠体 内各种组织的时空表达模式[21 机体发生发展过程 中的调控基因．以及外源刺激 1．基 因诱捕载体 物调控 的基因。Medico等 【】设计 了一套基因诱捕 基因诱捕载体根据载体的性质可分为：质粒 载体系统(ROSA—GFNR)用 以发现转录应答基因． 载体 、逆转