基因重组人附睾特异蛋白ESC42的抗菌谱研究.pdfVIP

· 280 · 中国生育健康杂志2010年第 21卷第 5期 · 实 验 研 究 · 基因重组人附睾特异蛋白ESC42的抗菌谱研究 沈肖方 王海燕 李建远 【摘要】 目的 利用基因工程技术合成人附睾特异蛋白ESC42进行抗菌谱的筛选，并探讨其 作用机制。 方法 用微量稀释法细菌敏感试验，观察该蛋白对大肠埃希氏菌ATCC25922，金黄色 葡萄球菌ATCC29213，铜绿假单胞菌ATCC17853以及临床分离耐药菌株大肠埃希氏菌、铜绿假单胞 菌的抑菌效果；应用溶血实验检测ESC42蛋白对兔红细胞的毒性作用。 结果 应用不同的蛋白浓 度作用细菌，随着时间延长和蛋白浓度的增加其抑制率逐渐增加。对兔红细胞没有毒性作用。 结 论 rhESC42蛋 白对细菌有一定的抑制作用，对真核细胞无害。 【关键词】 附睾；ESC42；抗菌； 真核细胞 AntimicrobialspectrumofrhESC42protein sHENXiaofang，WANGHaiyan，LIJianyuan．QingdaoU- niversityYantaiYuhuangdingHospital，Yantai264000，China A【bstract】 0bjective TosynthesizeESC42proteinbyusinggeneticengineeringtechniques，andto exploreitsantimierobialmechanism． Methods Bacterialmicrodilutionsusceptibilitytestmethodwasused toexaminetheantibacterialeffectoftheproteinon EscherichiacoliATCC25922．Staphylococcusaureus ATCC29213，andPseudomonasaeruginosaATCC17853，andtoclinicallyisolatedrug—resistantstrainsof Escheriehiacoli．Hemolyticassaywasusedtoevaluatetoxicityof (142Onrabbitredbloodcells． Results Inhibitionrateonbacteriaincreasedwithtimeand C42concentrations．Notoxiceffeetswereobserved onredblood cells． Conclusion ESC42proteinhasthepotentialtoinhibitbacteriawithouttoxicitytoeu— karyoticceils． 【Keywords】 Epididymis；ESC42；Antimicrobia；Eukaryoticcell 精子在通过附睾的过程中可以结合多种蛋 白， 室构建的人附睾eDNA文库中扩增到人ESC42基 从而获得运动和受精能力。最近报道显示，结合精 因，利用基因工程技术合成 rhESC42蛋 白进行抗菌 子的附睾特异分泌蛋 白具有抗菌活性 ¨ ，并行使 谱的筛选，并探讨其作用机制。 天然免疫系统的部分功能。ESC42(DEFB118)是附 材料与方法 睾分泌蛋 白且具有 B．防御素(betadefensin)样结构 的抗菌肽，除了抑制细菌生长之外，可能对衣原体、 一 、试剂与耗材 支原体、病毒、真菌甚至肿瘤都有抑制作用，在机体 1．cDNA文库：年轻人附睾eDNA文库由本室构建。 免疫防御反应中具有重要作用 J。目前，所有的常 2．质粒、菌株：原核表达质粒pET一25b和大肠 规抗生素都出现了相应的抗药性致病株系，致病菌 埃希菌BL21由北京大学人疾病基因研究中心马大 的抗药性问题已经Et益严重地威胁着人们的