花药培养过程中的灭菌与消毒.pdfVIP

第 20卷 第 3期 河 南教 育学院学报 (自然科 学版) Vol_20 NO．3 2011年 9月 JournalofHenanInstituteofEducation(NaturalScienceEdition) Sep．2011 花药培养过程 中的灭菌与消毒 王裔娜 (河南农业大学 园艺学院，河南 郑州 450002) 摘要：利用植物组织培养技术对花药进行组织培养，结合实验操作经验 ，总结了培养基、无菌室和超净工作台 的灭 菌方 法，论述 了工具器皿 的消毒过程 ，分析 了花 药的预处理与 消毒 方法 ，给 出 了常用消毒剂的使 用方 法． 关键词 ：花药；培养；灭菌；消毒 ；温度 中图分类号 ：Q944．6 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—0834(2011)03—0047—04 0 引言 植物组织培养是根据植物细胞具有全能性的理论 ，在无菌条件下，将离体 的植物根尖 、茎尖、组织 、细胞 、 胚胎 、原生质体 、悬浮细胞等在人工配制的培养基上培养 ，给予适宜的培养条件 ，诱发其产生愈伤组织或潜伏 芽或长成完整的植株的技术．植物组织培养也称离体培养或试管培养． 花是被子植物特有的有性生殖器官 ，在花中形成有性生殖过程中的雌 、雄生殖细胞 ，以繁衍后代 ，延续种 族 ，而花药则是雄蕊的重要组成部分．从结构上看 ，花药是由药壁 、药隔、花粉囊和花粉粒组成．花药培养是指 将完整的花药接种到培养基上 ，诱导形成单倍体再生植株的方法．花药是几乎所有植物器官中很好的无毒部 分 ，因此是进行选育优 良单倍体植株或获得纯系育种材料的最佳选择． 花药培养 的主要 目的是进行单倍体育种 ，缩短育种年限和提高育种效率及获得纯系育种材料．在育种领 域中，花药培养育种已与常规杂交育种 、远缘杂交育种 、诱变育种以及转基 因技术相结合 ，是生物技术在农作 物育种中应用最广泛 、最有成效的方法之一．但是在花药培养过程中，如果控制不好 ，污染是经常发生的．灭 菌和消毒是一个关键环节 ，这个关键环节出现失误或者操作不当就会造成花药培养失败 ，前功尽弃． 1 花药培养基的灭菌 由于花药培养基在制备过程 中带有各种杂菌，所以微生物污染开始就在培养基中存在．分装后的培养基 应立即灭菌 ，至少应该在 24h之 内完成灭菌工作 ，常规方法是采用高压蒸汽灭菌锅灭菌． 1．I 理论灭菌时 问的确定 微生物的湿热灭菌过程 ，其本质上就是微生物细胞内蛋 白质的变性过程 ，从这个意义上讲 ，灭菌过程应 遵循单分子反应的速度理论… ，即满足方程 一 d￡：…。，’ (1) 式 中，Ⅳ表示残存的活菌数 ，t表示灭菌时间， 表示灭菌速度常数 ，也称反应速度常数 ，此常数的大小与微生 物的种类与加热温度有关 ，dN／dt表示活菌数瞬时变化速率 ，即死亡速率．该方程称为对数残存定律 ，表示微 生物的死亡速率与任一瞬时残存的活菌数成正比． 将 (1)式积分 ，转换得 1 No 2 303， No ． m ■ g ， (，2、) 其 中， 表示灭菌速度常数 ，t表示理论灭菌时间，Ⅳ是经时间 t后残存的活菌数 ，Ⅳ0是 t=0时原有活菌数． 在计算理论灭菌时间时首先要注意 值与微生物种类 、生理状态 、外界环境等有关系，即 K是微生物热 阻的一种表示形式 ，微生物的热阻越大 ，K值越小．其次 可 以参考一般培养基中的活微生物数为 (1—2)× 10个 ／mL，N，通常取 0．001个 ，即灭菌失败的概率为 1／1000．最后 ，理论灭菌时间只可 以用于工程计算 中， 收稿 日期 ：201l一04—25 作者 简介 ：王裔娜 (1989一)，女 ，河南郑州人 ，河南农 业大学 园艺学 院 48