脂肪酶催化红花油水解的选择性研究.pdfVIP

№ ．4 陕西科技大学学报 Aug．2011 · 20 · JOURNALOFSHAANXIUNIVERSITY OFSCIENCE TECHNOLOGY Vo1．29 文章编号 ：1000—5811(2011}04—0020—04 脂肪酶催化红花油水解的选择性研究 冯瑞军 (新疆轻工职业技术学院，新疆 乌鲁木齐 830021) 摘 要：在无溶剂体系中用脂肪酶 LipaseLVK 、LipaseAY30G及 LipaseF—AP15催化红 花油水解，测试了水解产物 中脂肪酸与酯的碘值及酯中单甘酯的含量，研究了脂肪酶对脂肪酸 种类的选择性 以及对甘油酯键位置的选择性．结果表 明，脂肪酶 LipaseLVK 、LipaseAY 30G没有位置选择性和脂肪酸选择性 ，而 LipaseF—AP15无脂肪酸选择性，但有一定的位置选 择性 ． 关键词 ：红花油；脂肪酶；水解；选择性 中图法分类号：Q814．9 文献标识码 ：A 0 引 言 酶催化反应 的选择性有很好的实用价值 ，近年来 日益受到人们的重视．近年来对酶的选择性的研究主 要集中在立体选择性及对映体的拆分上 ，而对水解中酶 的位置选择性和脂肪酸类型选择性 的研究鲜 有报道．本文所用脂肪酶 LipaseLVK来源于黑曲霉 ，文献对其专一性的报道并不一致．另外 ，脂肪酶 I paseF—AP15是一种 sn一1，3位选择性脂肪酶 ，其选择性水平有待研究．本文对脂肪酶 LipaseLVK、Lipase AY30G 以及 LipaseF-AP15的位置选择性 、脂肪酸选择性进行 了研究测试． 1 材料和方法 1．1 主要 原料 及试 剂 脂肪酶 LipaseLVK(粗酶粉 ，深圳市绿微康生物工程有限公司)，来源于黑 曲霉 ，活力为 25000U／g． LipaseAY30G (AmanoEnzymeINCNAGOYA，Japan，天野公司惠赠)，来源于假丝酵母 ，活力为 30000U／g． LipaseF—AP15(AmanoEnzymeINCNAGOYA，Japan，天野公司惠赠)，来源于根霉，其活力为 150000U ／g． 红花油 ，产地：伊犁 ，碘值_4]：146．2mg／g，其脂肪酸含量气质色谱分析结果见表 1． 表 1 红花油中脂肪酸含量分析 0．1mol／L氢氧化钾／乙醇标准溶液 ，0．5mol／I 氢氧化钾 ／乙醇标准溶液． 0．1mol／L硫代硫酸钠标准溶液，0．1mol／I氯 化碘冰醋酸标准溶液重铬酸钾 (基准物)，薄层层析硅胶 G． 1．2 仪 器及设备 ZD-8802型摇床 (太仓市科教器材厂)；Orion828型酸度计 (美国奥立龙)．高速组织捣碎机；微量注射 * 收稿 日期 ：2011-06—08 作者简介 ：冯瑞军(1963～)，男 ，河南省洛 阳市人 ，高级讲师 ，研究方向：蛋白质化学 第 4期 冯瑞军 ：脂肪酶催化红花油水解 的选择性研究 ·21 · 器 ． 1．3 分 离及检 测 方 法 1．3．1 水解产物中脂肪酸与混合酯 的分离方法 向洗去酶粉后 的水解产物中加入酚酞指示剂 ，加入 0．5mol／LKOH／乙醇至溶液呈深红色 ，KOH优 先与脂肪酸 (FFA)形成水溶性皂 ，加入适量水 、正己烷及适量 乙醇 ，溶液中脂肪酸皂与混合酯分离 ；上 层溶液蒸去正 己烷后得到混合酯 ；下层溶液 (脂肪酸皂 的水溶液)中加入 6mol／IHC1，调节至 pH为 2，用 正己烷提取上层脂肪酸 ，蒸去正 己烷后 ，得到游离脂肪酸． 1．3．2 单甘酯含量 的测定 由于所用红花油的不饱和度较高，因此直接用常规方法 测定产物中的单甘酯含量时误差较大 ，实验 中加入足量的氯化碘 (IC1)一冰乙酸溶液 ，使其不饱和键转化为饱和键