银杏叶提取物对肝纤维化大鼠TGF-β1表达的影响.pdfVIP

维普资讯 · l86 · 中国中医药科技2008年5月第 15卷第 3期 May2008Vo1．15No．3 银杏叶提取物对肝纤维化大 鼠TGF—I3。表达的影响* 姚嘉明 陈芝芸 严茂祥 张晓苹 何蓓晖 (浙江中医药大学2001级七年制授硕士学位研究生 ·杭州 310006 ’浙江中医药大学附属第一医院 ·杭州310006) 摘 要 目的：观察银杏叶提取物(GbE)的抗大鼠肝纤维化作用及其作用机理。方法：采用 CCl,诱导大 鼠肝纤维化，同时分别以3个剂量的GbE进行干预，并设复方鳖 甲软肝片为对照组，6周后取肝组织进行 HE及Masson染色，观察肝组织炎症活动度及肝纤维化程度，采用免疫组化法测定肝组织 a—SMA、IGF— B蛋白表达，采用RT—PCR检测IGF一晶nlRNA的表达。结果：GbE各剂量组及复方鳖甲软肝片组肝组织 炎症活动度及肝纤维化程度较模型组明显改善，a—SMA蛋白表达及IGF一晶nlRNA和蛋白表达也较模型 组显著下降。结论 ：GbE可能通过抑制肝星状细胞的激活和转化，降低a—SMA蛋白表达及 TGF一岛的转 录及表达，抑制 cCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生及发展。 主题词 肝硬化／中医药疗法 银杏叶提取物 ／治疗应用 基 因表达 大鼠 肝纤维化是所有肝脏疾病末期并发症的基础。TGF—B 1．3 实验仪器 PCR仪：日本大和公司。HP8453紫外可见 是体内最强和最广泛的影响纤维产生的介质之一 ，对细胞的 分光光度计：美国HP公司。BioSenSC300凝胶图像分析仪： 生长、分化、细胞外基质的聚集和免疫反应有着广泛潜在影 上海山富科学仪器有限公司产品。Biofuge28RS低温高速离 响的多功能肽类生长因子，尤其 TGF一晶在肝纤维化的发展 心机：德国Heraeus公司。DYY—BC型 电泳仪：北京六一仪 中具有重要作用。银杏叶提取物 (Ginkgobilobaextract，GbE) 器厂 。 目前已在多项动物实验和临床应用中被证明具有抗肝纤维 1．4 肝纤维化模型的建立 将 cch以橄榄油配制成40％ 化的作用n]，本研究进一步探讨 GbE的抗肝纤维化作用及 浓度 (wV)，皮下注射3m~ks体重 ，每周2次，首次加倍，连续 其对肝组织TGF一晶表达的影响。 6周建立肝纤维化模型，正常组以等容量的橄榄油皮下注 1 材料及方法 射。 1．1 实验动物 sD大鼠6o只，雌性，清洁级，体重 190～ 1．5 实验分组及处理 6o只SD大 鼠随机分成 6组 ，每组 10 210g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供 ，许可证号：SCXK 只，正常组每周 2次用橄榄油皮下注射，同时每天灌服等容 (沪)2003—0003。 量的蒸馏水；模型组在造模同时每天灌服等容量的蒸馏水； 1．2 主要试剂与药物 CCl,：上海凌峰化学试剂有限公司 GbE 高、中、低剂量组在造模 同时每天分别灌服 GbE混悬液 产品。GbE：西安中鑫生物技术有限公司，批号050118。其中 200mg／kg、100mg／kg、50me,／ks；复方鳖甲软肝片组在造模同时 黄酮苷2，4．o3％、银杏内酯6．15％。复方鳖甲软肝片：内蒙古 每天灌服复方鳖甲软肝片混悬液 1异，l(g，均连续6周。所有 福瑞中蒙药科技股份有限公司产品，批号20o512o8。Tfizol： 大鼠予以标准大鼠饲料喂养 ，自由饮水。末次给药当晚大 鼠 美国Invitrogen公司产品。Taq酶、逆转录酶 MMLV、三磷酸脱 禁食不禁水，次13上午空腹用3％戊 巴比妥钠腹腔注射麻醉 氧核苷 (dNTP)：均为美国Promega公司产品。寡核苷酸 (Olig 处死 ，分离肝脏。部分投入液氮 中冻存 ，3小时后移入 一 dnr)：上海博亚公司合成。标准分子量DNAmarkerD[2000：日 70 冰箱中保存，用于