吸血蠓类DNA条形码标准基因鉴定方法-第1部分.docVIP

ICS点击此处添加ICS号 点击此处添加中国标准文献分类号 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T XXXXX—XXXX 吸血蠓类DNA条形码标准基因鉴定方法 第1部分：通用要求 The molecular identification of blood-sucking midges based on DNA barcodes—Part 1：General requirements 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 本稿完成时间：2013-11-25 XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 前言 SN/T XXXXX 《吸血蠓类DNA条形码标准基因鉴定方法》共分为以下部分： —第1部分：； —第2部分：。 本部分为SN/T XXXXX的第1部分。GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、厦门出入境检验检疫局、江苏出入境检验检疫局、福建农林大学。 本标准主要起草人：黄恩炯、吸血蠓类DNA条形码标准基因鉴定方法 第1部分：通用要求 1 范围 本标准规定了国境口岸医学媒介生物实验室采用COⅠ基因进行吸血蠓种类（种间水平）鉴定的通用要求，包含人员、设施环境、仪器设备和试剂等方面。 本标准适用于国境口岸开展吸血蠓类分子鉴定的医学媒介生物实验室。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 吸血蠓类 blood-sucking midges 一类微小昆虫，分类学上属于节肢动物门（Arthropoda）昆虫纲（Insecta）、双翅目(Diptera)、长角亚目（Nematocera）蠓科（Ceratopogonidae）Lasiohelea）、库蠓属（Culicoides）和细蠓属（Leptoconops）3个属。 2.2 DNA条形码 DNA barcodes 生物体内能够代表该物种的，标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA片段。 COⅠ: 细胞色素氧化酶亚基Ⅰ DNA：脱氧核糖核酸 PCR：聚合酶链式反应 ddH2O：双蒸水 h：小时 min：分钟 s：秒 EB：溴化乙锭 μL：微升 mg/mL：毫克/毫升 TE缓冲液Tris-EDTA 缓冲液TAE缓冲液Tris-乙酸 缓冲液a）裂解缓冲液； b）TE缓冲液； c）蛋白酶K； d）EB； e）琼脂糖； f）引物： 一般采用国际条形码计划标准引物对： LCO 1490: 5’GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G 3’ HCO 2198: 5’TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA 3’ 若标准引物扩增失败，可采用以下引物对： C1-J-1718 5’ GGA GGA TTT GGA AAT TGA TTA GTT CC3’ C1-N-2191 5’CCC GGT AAA ATT AAA ATA TAA ACT TC3’ g）TE缓冲液；PCR MasterMix。 标本 应尽可能选择新鲜标本，标本宜保存于95%酒精中，每份标本（或组织）单管保存，并做好唯一性标识。 _________________________________ SN/T XXXXX—XXXX 3