傅里叶显微红外研究C末端酸性蛋白对α硫素原核表达过程的影响.pdfVIP

第29卷，第12期 光谱学与光谱分析 200 and 9年12月 SpectroscopySpectralAnalysis December，2009 傅里叶显微红外研究C一末端酸性蛋白对口一硫素原核表达过程的影响 刘 艳1，冯 娟h，陶栋梁3，翁诗甫3，任正隆1’2。 1．电子科技大学生命科学与技术学院，四川成都610054 2．四川农业大学植物遗传育种省级蓖点实验室，四川雅安，625014 3．北京大学化学与分子工程学院，北京 100871 摘要采用傅里叶变换显微红外手段研究了在信号肽缺失的情况下，c．末端酸性蛋白的存在对小麦口-硫 素原核表达过程中蛋白质二级结构的影响。SDS表明带有酸性蛋白(Sc样品)的重组质粒在大肠杆菌 BL21(DES)中以包涵体形式高效表达；而酸性蛋白缺失(S样品)可以极大提高外源蛋白的可溶性。通过对含 630 有s及Sc的全细胞在诱导前及诱导后2h的酰胺I带区域图谱求筹谱及二阶导数谱，发现诱导前在1 ClTI 630 1处吸收较弱，而在诱导2h左右，在1 cInl处检测到明显的吸收峰，该位置的吸收主要来自于聚集 体的贡献。进一步对酰胺I带厌域进行傅里叶去卷积处理，结合高斯曲线拟合，发现在sc样品中随着诱导 时间的增加，聚集体含龋逐渐增加，这与SD§PAGE结果一致。此外，伴随着聚集体的形成，口-螺旋的含量 逐渐增加；而伊折叠和无规卷曲的含量却逐渐减少。在S样品中观察到兄规卷曲的含最随诱导时I’日j的增加 逐渐提高，而p_转角及(1 629±1)crfl_1处对应的p折叠的含量却逐渐减少。上述现象表明：c．末端酸性蛋白 的引入导致表达过程中p折叠和无规卷曲逐渐向聚集体和旷螺旋转化。 关键词显微红外；C-末端酸性蛋白；口-硫素；原核表达；二级结构 中图分类号：Q657．3文献标识码：A 量分析，因此在本文中运用了傅里叶一显微红外手段对表达 引 言 过程中蛋白的结构进行检测，并获得了一些初步结果。 口-硫素足一类富含半胱氨酸的碱性多肽，具有抗细菌、 1实验部分 抗真菌、抑制哺乳动物细胞牛长等功能[1。4]。大量研究表明： 编码口-硫素的基因的mRNA序列由N-末端信号肽，中间成 1．1仪器 熟肽及(、_末端的酸性蛋白组成，其中N_末端信号肽会在翻 NieoletiNl0 MX傅里叶变换红外光谱仪。 译过程被切割掉，而C_末端酸性蛋白会在翻译之后被切割 1．2驴硫素蛋白的原核表达 掉『5j。为什么天然的体系会存在这样一个过程?而D末端酸 coli BL2l(DE3) 采用pET-32(a)作为原核表达载体，E 性蛋白的存在究竟会对其结构及功能产生什么影响呢?鉴于 为宿主菌，携带(’-末端及【末端缺失的重组质粒在180 原核表达体系中不存在切割相关的酶，因此首先选择了原核 体系，在信号肽缺失的情况下，分别对携带及不携带C-末端 人终浓度为1 酸性蛋白的外源基网进行r表达(相应的蛋白分别命名为sc h 合蛋白分别称为Sc及S。在诱导前及诱导后1，2，4和6 及s)，结果发现前者