土壤微生物总DNA的提取和纯化.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 %’ (! - (# 年 月 #$$ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,’ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 土壤微生物总!# 的提取和纯化 ， / / # / / / 张瑞福 曹 慧 崔中利 李顺鹏 樊 奔 / （南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 南京#/$$2. ） # 中国科学院南京土壤研究所 南京 ） （ #/$$$C 摘 要：本文建立了从土壤中提取总D-) 的方法，并通过改进使适合于对革兰氏阳性菌的提 取。用2 种性质不同的土壤进行验证，均提取到了D-)，每克干土的D-) 提取量从 @$ ; E ! / @!/ ;，通过透析袋回收进行纯化，纯化回收率达到?. @! F ，纯化后的土壤D-) 可以直接扩 ! 增出 。 种土壤的提取率从 ，可以从每 干土添加 个菌体的 /?G +D-) 2 ?$ @./F E 2 @!. F ; ?# 土壤中扩增到目的条带。 关键词：土壤 提取，纯化，提取量，提取率， 扩增 D-) HIJ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） G/.! @! ) /$$?0?/32 #$$ $#0$#3?0$3 ［，］ / # 从自然环境中提取细菌D-) 是非常有用的方法，可用于检测不可培养的细菌 ，跟 ［，］ 踪某些目标菌株或重组基因在自然环境中的行为 ! 。也可以用来揭示土壤微生物生态 ［］ . 系统中的基因的多样性及其随环境的变化 。从环境样品中抽提和纯化D-) 是最关键 ［］ 的技术问题之一。来自环境中的样品含有非常复杂的成分? ，尤其是土壤中的腐质酸类 物质在提取过程中不能去除掉，直接影响后续的HIJ 扩增、杂交、内切酶消化等。本文建 立了适合从不同土壤提取总D-) 并进行纯化的方法，可应用于环境中微生物的研究。 $ 材料和方法 $% $ 土壤样品的采集与性质测定 从各地采集了不同性质的土壤，基本性质如表/。 $% 菌株 大肠杆菌 ，霉状芽孢杆菌（ ），枯草芽孢杆菌（ ! ( #$% DK.