小麦生理型和遗传型雄性不育系及其保持系小花完整叶绿体蛋白质组分比较研究.pdfVIP

作物学报 ACTAAGRONOMICA SINICA 2011，37(7)：1134—1143 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN0496—3490；CODENTSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DoI：10．3724／SP．J．1006．2011．01134 小麦生理型和遗传型雄性不育系及其保持系小花完整叶绿体蛋白质组 分比较研究 李 莉 王书平 张改生 王亮明 宋瑜龙 张龙雨 牛 娜 马守才 西北农林科技大学陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室 ，小麦育种教育部工程研究中心，陕西杨凌 712100 摘 要：采用固相pH梯度 SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术，以小麦遗传型雄性不育系ms(S)一1376、杀雄剂 SQ一1 诱导的生理型雄性不育系 ms(A)一1376，以及对应的保持系(A)一1376(杀雄剂诱导前的正常可育系)所构建的等基 因和 等生理差异系为试材，比较分析了2种分离纯化完整叶绿体的方法。在确立了一套适用的技术方法的基础上，研究了 三者在花粉小孢子萌发单核早期小花完整叶绿体蛋 白之间的差异。采用 30％、45％和 60％的不连续蔗糖密度梯度离 心的方法能够获得完整且纯度较高的叶绿体，经TCA．丙酮提取蛋白质后，PDQuest软件分析，在分子量 l4．4～66．2kD， 等电点 4～7的线性范围内可分辨出2-DE图谱上 239个较为清晰的蛋白质点，对其中的6个差异表达蛋白质点进行 MALDI．TOF肽质量指纹 图谱分析，从生物信息学数据库检索鉴定出6个差异蛋白质点分别是酰基辅酶 A脱氢酶结 构域蛋白、钙调结合蛋 白磷酸酶、多催化功能肽酶、热休克蛋白60、光受体蛋白2及 1个未知功能的表达蛋 白质。 这些蛋白质在供试小麦叶绿体物质能量代谢、叶绿体防卫抵御机制、叶绿体细胞内信号转导及植物极性生长等生理 应答反应中起调控作用，它们能在本研究供试两不育系和对应可育系中差异表达，可能与雄性不育相关。 关键词：小麦；遗传型和生理型雄性不育；完整叶绿体蛋白质组；差异表达；2D—PAGE；MALDI—TOF—MS ComparisonofFloretIntactChloroplastProteomein MaleSterileLine InducedbyCHA-SQ-1，Cytoplasmic-nuclearSterileandItsNormalFer- tileLinesinW heat LILi，WANG Shu—Ping ，ZHANG Gai．Sheng，WANG Liang—M ing，SONG Yu—Long，ZHANG Long—Yu， NIU Na．andMA Shou-Cai KeyLaboratoryofCropHeterosisofShaanxiProvince，NorthwestAFUniversity／WheatBreedingEngineeringResearchCenter,M inistryofEdu cation，Yangfing712100，China Abstract：Weextractedfloretchloroplastproteinsfrom thegeneticmalesterilelinems(S)一l376，thephysiologicalmalesterile linems(A)一1376inducedbychemicalhybridizingagentSQ一1，andtheircounterpartmaintainerline(A)一1376(normalfertility)． Theseproteinswereseparatedvia2一D elecrtophoresiswiht immobilizedpH 4—7gradientsashtefirstdimensionandSDS—PAGE asthesecondone．Weestablishedasetoftechniqueavailableforintactchloroplastisolationand2一DE ofproteinsinwheatfloret na dcompraedtheeffectofintactchloroplastpurificationusingtwomethods．Basedonhte2一DEtechnique，weexploredthedif-