解淀粉芽孢杆菌YN-1抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2010年，第 29卷，第 5期，第 823- 828页 GenomicsandAppliedBiolog�,2010,Vol.29,No.5,823- 828 研究论文 AnArticle 解淀粉芽孢杆菌 YN- 1抑菌蛋白 基因的克隆及原核表达 ���� 11,21*121 杨丽荣 王正军 薛保国 刘红彦 马建岗 郑亚平 1河南省农业科学院植物保护研究所,郑州,450002;2西安交通大学生命科学院,西安,710049 *通讯作者,�uebbb@ 摘 要 本文 以解淀粉芽孢杆菌 YN- 1菌株为研究对象，利用 PCR方法从基 因组 DNA中扩增 出编码 ���� 抑菌基 因的全长 DNA，并构建 pGEX- 4T2/TasA原核表达载体，获得 TasA-GST融合表达 的抑菌蛋白�测序 结果表 明，解淀粉芽孢杆菌 YN- 1基因核苷酸序列全长为 786bp(GenBank登录号:EU131674)，编码 ���� 261个氨基酸残基；同源性分析表 明，它与解淀粉芽孢杆菌 �.�����������������FZB42(YP_001421886)序列 的同源性最高，达 98%，预测蛋白分子量为 31kD�SDS分析表明， 基因能在大肠杆菌 BL21中表 ���� 达 ，Western印迹分析 pGEX- 4T2/TasA原核表达载体 ，检测到约 57kD的 TasA-GST融合外源蛋白，与预测 的融合蛋白分子量大小相符�表达产物细胞裂解液上清经 Ni柱层析 ，表明浓度为 500mmol/L咪唑洗脱缓冲 液时获得较高浓度和纯度 的纯化蛋 白�进一步抑菌活性分析表明表达产物对黄瓜灰霉病病原菌检测平板上显 示 出较好的抑菌活性�本研究结果将为今后深入研究 抑菌蛋白基 因以及抗病转基 因工程提供了参考� ���� 关键 词 解淀粉芽孢杆菌,抑菌蛋 白,基 因克隆,原核表达 ClongingofAntagonisticProteinGenein����������������������������� YN- 1andItsProkar�oticE�pression 1 1,2 1* 1 2 1 YangLirongWangZhengjunXueBaoguoLiuHong�anMaJiangangZhengYaping 1PlantProtectionInstitute,HenanAcadem�ofAgriculturalScience,Zheng�hou,450002;2CollegeofLifeScience,Xi�anJiaotongUniversit�,Xi�an, 710049 *Correspondingauthor,�uebbb@ DOI:10.3969/gab.029.000823 ��������Inthispaper,�etook�������������������������YN- 1strainastheresearchobject,amplifiedthe full-lengthDNAencodinganantagonisticproteinTasAfromitsgenomicDNAb�PCR,consrtuctedthe prokar�otice�pressionvectorpGEX- 4T2/TasAandalsoobtainedtheantagonisticproteinofTasA-GSTfused e�pression.Thesequencingresultsho�edthatthefulllengthnucleotidesof����genein��������������������� YN- 1�as786bpinsi�e(GenBankaccessionnumber:EU131674)andencoded261aminoacidresidues. ����� Thehomogeneousanal�sisdemonstratedthatthededucedaminoacid