高效液相色谱法测定奶牛乳汁中恩诺沙星与环丙沙星残留量.pdfVIP

试 验 研 究 高效液相色谱法测定奶 牛乳汁 中 恩诺 沙星与环 丙沙星残 留量 欧阳迪勇 ，黄小洁 (1．广东省佛山市三水区芦苞镇动物防疫检疫站。佛山5281O0；2．中国兽医药品监察所，北京 100081) 关键词：恩诺沙星；环丙沙星；高效液相色谱法；奶牛乳汁；残留 DOI：10．3969／J．ISSN．1671—6027．2010．12．017 恩诺沙星又名乙基环丙沙星，是第三代氟喹诺酮类抗菌 色 谱 柱 ：HypersilBDS～C18，5 m，4．6X250mm，批 号 ： 药，为动物专用；在临床上诸多恩诺沙星类产品被广泛应用 5／1206／706，大连依利特公司生产；流动相：O．015molL／四丁基 于奶牛乳房炎的治疗。但食品动物中的药物残留会对消费者 溴化铵溶液 一乙腈 (91，9，V厂v)，以85％磷酸调 pH值至3．0； 的健康造成危害，并且长期用药会产生耐药菌株，从而影响该 柱温 ：30℃；流速 ：1．0mL／min；进样量 ：20 L 类药物的临床疗效，国家农业部 235号公告规定恩诺沙星 2．3 标准 曲线与线性范围的测定 (恩诺沙星的主要活性代谢产物为环丙沙星)在牛奶中的最高 在 8支微量离心管中各加入0．8mL空白乳样，除第一支 残留限量(MRL)量不得超过 lO0XIg几。本试验建立的检测方 管外其余各管依次加入 8 L系列浓度的恩诺沙星、环丙沙 法测定乳汁样品中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的浓度， 星混合标准液 (2-200 gm／L)，旋涡混匀，使得各样品中制得 为恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在奶牛的群体药动学研 的恩诺沙星和环丙沙星的浓度都为0．02～2 g／mL，第一管不 究提供准确、可靠的药物浓度数据。 加药物作空 白对照。按 2．1方法进行处理后，上机测定。采用 1 材料与仪器 外标法 ，分别将恩诺沙星和环丙沙星的色谱面积(A)与相应 1．1 药品与试荆 药物浓度(c)作标准曲线，恩诺沙星和环丙沙星的标准曲线、 恩诺沙星对照品：含量为 100．1％，批号 ：H010204，中国 回归方程和相关系数。 兽医药品监察所；盐酸环丙沙星对照品：含量为 100．0％，批 2．4 方法准确度和精密度 号：H010105，中国兽医药品监察所；恩诺沙星原料药：含量为 采用标准添加法，准确吸取0．8mL空白乳汁于3个微量 99．7％，批号：0200409043，浙江国邦兽药有限公司；乳酸、三 离心管中，分别加入 2、20、200 g／mL恩诺沙星与环丙沙星 氯乙酸(TCA)、二氯 甲烷、四丁基溴化铵均为国产分析纯试 混合标准液 8txL，涡旋混匀，制得三个对应药物浓度的标准 剂；甲醇、乙腈均为色谱纯。 添加样品进行回收率试验，各浓度进行5个样品平行试验， 1．2 仪器与设备 重复5次，求批内、批间相对标准偏差。 电子分析天平：AE160型 ，瑞士 Mettler公司 ；台式高速 2．5 奶牛肌注恩诺沙星后乳汁中药物浓度的测定 离心机：58o4(R)5／801(R)型，德国Eppendorf公司；高效液相 给药后采集的乳汁样品，按2．1方法处理，作HPLC分 色谱仪：Waters2695和Waters2475荧光检测器，美国Waters 析 ，然后把测得的峰面积带入相应的标准曲线求得乳汁样品 公司；色谱柱 ：HypersilBDS，4．6mmx250ram，5 m，批号 ： 药物浓度。 5／120／6706，大连依 利 特公 司 ；超 声机 ：HS10260D型 ， 3 实验结果 BENCHTOP公司；棕色 自动进样瓶 ：2mL，批号：2129100003， 3．1 色谱图 美 国AG