骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病中转录因子CCAAT／增强子结合蛋白ζ转录本的定量研究.pdfVIP

维普资讯 · 316· 空堡 遮堂苤查 5月第26卷第5期 ChinJHematolMa ： · 短 篇 论 著 · 骨髓增生异常综合征和急性髓系 白血病 中 转录因子 CCAAT／增强子结合蛋 白 转录本的定量研究 钱军 陈子兴 林江 胡绍燕 岑建农 王玮 转录因子 CCAAT／增强子结合蛋 白(C／EBP)是一组具 4 RQ—PCR引物设计与合成 HJPrimer‘Express2．0软件 有同源序列的转录因子 ，在细胞增殖 、分化、凋 和免疫调节 (ABI公司)和 PrimerPremier5．0软件 (PremierBiosoft公 司) 多种细胞反应中发挥着重要作用 。,2i C／EBPc~基因突变如 设计和评价 RQ—PCR引物和TaqMan探针序列 ，C／EBP~／序列 碱基替换 、缺失、重复等可见于骨髓增生异常综合征(MDS) 分别为 5一GGAGcTGGAAGcCTG(ATG一3 (上游 引物)、5一 和急性髓系 自血病 (AML)f3J．．C／EBP~／，义称为生长阻滞和 FAM—TCTTCACCACTCTTGACCCTGCITrCTCT—TAMRA一3 (探 DNA损伤诱导基冈3(GADDI53)、DNA损伤诱导的转录闪 针)和5．GCTCTGGGAGGTGCTI(,3、一3( 游引物)；ABL序列 子 3(DDIT3)、CHOP10，目前对其存各种疾病状态 巾的表达 分 IJ为 5一TccTccAGcTGTTATcTG(AA(A一3 (1游弓I物)、 状况研究甚少 我们在应用 eDNA微阵列技术对 l0例 MDS 5一FAM—CGGCCAGTAGCATCTGACTlVFGA(,CCT—TAMRA一3 患者的表达谱研究时发现 C／EBP~在9例患者巾的表达均 明 (探针)和5一TCCAACGAGCGGCTI’CAC一3(下游引物)；引物 显降低 。为此 ，我ff】应用实时定量 PCR(RQ—PCR)方法进一 和探针在上海博亚生物技术公司合成 步分析了C／EBP~在 MDS和 AML巾的转录本水平 ，发现 c／ 5 RQ—PCR检测 取 50ngeDNA进 行实 时定量 PCR扩增 EB 基因表达异常可能与 MDS和AML发病相关 (PE5700，ABI公司)，反应体系为25 l， 10×缓冲液 2．5 l、4．0mmol／LMgC1、0．2nlnlo1／lJlN‘FP、0．3trmol／l引物 、 材料和方法 0．2trmol／L探针和 1UTaq酶 95 预变性5rain，然后94 ℃ l5S、60℃ Imill共45个循环 以吞家基 I ABI为内参 1 病例 98例患者诊断主要根据 FAB标准 MDS患者 47 照 ，反应条件 同C／EB C／EBP~棚 ABL转录本的绝对量 例 ，其 中难治性 贫血 (RA)28例 、RA伴原始细胞 增多 表示为每50ng总 RNA中含有的拷 贝数，而每例患苦巾c／ (RAEB)l5例 、转化巾的 RAEB(RAEB—t)4例；AML患者51 EB 转 录本 的值 则 以相对 含量 丧 ，J：N = (拷 j!『 例 ，其中M。7例 、M!l2例 、M317例、M 4例 、M 5例 、M 6 数 ¨ ／拷