骨髓增生异常综合征与白血病细胞p15INK4B基因甲基化及机制研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiol哑 !!!2 Z二 [文章编号] 1000—4718(2004)12—2257一o4 骨髓增生异常综合征与 白血病细胞 pl5INK4B 基 因甲基化及机制研究* 佟红艳， 林茂芳 (浙江大学医学院附属第一医院血液科 ，浙江 杭州 310003) [摘 要] 目的：探讨pl5INK4B基因甲基化异常和血液系统肿瘤发病的关系及甲基化异常的机制。方法：采 用RT—PCR、甲基化特异PCR、Westemblot法检测2o例骨髓增生异常综合征 (MDS)、20例急性白血病患者 (AL)、14例 慢性粒细胞性白血病(CML)患者骨髓单个核细胞 pl5INK4B基因mRNA和pl5INK4B蛋白的表达、pl5INK4B基因甲基 化及甲基转移酶(DNMTs)的表达。结果 ：高危组 MDS患者 pl5INK4B蛋白表达 阳性率低于低危组 MDS患者 (10％ 8o％，P0．01)，pl5INK4B基因甲基化阳性率较高 (60％ 10％，P0．01)。2o例AL有9例(45％)存在pl5INK4B基 因甲基化。10例CML慢性期 (CML—cP)患者仅 1例存在 pl5INK4B基因甲基化。4例CML急变期 (CML—BP)患者均 检测到 p15INK4B基因部分甲基化。DNMT3^、DNMT3B表达在 AL、高危组 MDS和 CML—BP患者均明显高于低危组 MDS(P0．05)。结论：pl5INK4B基因甲基化在 AL、高危组MDS和 CML—BP患者发生率高于低危组 MDS，伴有甲基 转移酶 DNMT3^、DNMT3B表达较高。pl5INK4B基因甲基化可能参与 MDS和AL的发病机制并与 MDS及 CML的预后 有关。 [关键词] 基因，pl5INK4B；骨髓增生异常综合征；白血病；甲基化；甲基转移酶类 [中图分类号]R363 [文献标识码] A pl5INK4B基因表达产物 pl5INK4B蛋 白是细胞 tion，RAEB—t)10例；20例为初发AL患者，其中急性 周期依赖性激酶4(cyclin—dependentkinase4，CDK4) 髓细胞性 白血病 (acutemyeloidleukemia，AML)10例， 和CDK6的抑制剂，通过抑制它们的丝氨酸／苏氨酸 急性淋 巴细胞性 白血病 (acutelymphocyticleukemia， 激酶效应，阻断分裂细胞 由 期向S期过渡，从而 ALL)1O例；10例 CML慢性期(CMLinchronicphase， 抑制细胞增殖。pl5INK4B在许多组织 中都有表达 ， CML—CP)患者，4例 CML急变期(C池 inblastphase， 该基因失活则丧失其调控细胞增殖的作用。启动子 CML—BP)患者。诊断均按文献LlJ标准。抽取 以上 甲基化是 pl5INK4B基因失活的主要方式。我们检 患者骨髓液，用 3．8％枸橼酸钠抗凝，Ficoll淋 巴细胞 测了2O例急性 白血病 (acuteleukemia，AL)、2O例骨 分离液分离 MNCs，取 1×106个细胞 ，一8O℃备用。 髓增生异常综合征 (myelodysplasticsyndrome，MDS)、 以正常人 1O名作为对照。 14例不同病期慢性粒细胞性 白血病 (chronicmyeloid 2 甲基化 PCR(methylation—sl~xificPCR，MSP) leukemia,CML)患者骨髓单个核细胞 (mononuclear 参考Herman等L2J的实验方法并加改动。 cells，MNCs)pl5INK4BmRNA和蛋 白的表达、其 甲基 2．1 DNA处理 常规酚／氯仿方法提取细胞基因组 化状态及 3种 甲基转移酶 (DNAmethyrltransferases， DNA。取 DNA 10／．tg溶于 40止 去离子水 中，加入 DNMTs)的表达情况，以探讨基因组 甲基化异常和血 1．0molfLNaOH 10止 。37oC 10min，加入新鲜配制 液系统肿瘤发病的关系。