重组SARS冠状病毒M蛋白的表达、纯化及鉴定.pdfVIP

生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ISSN ACTA BIOCHIMICA et BIOPHYSICA SINICA 2003 , 35 ( 12) : 1140 - 1144 CN 311300Q 研究简报 重组 SARS 冠状病毒 M 蛋白的表达、纯化及鉴定 # ＄# 张晓丽 　王晶茹 　张 　燕 　陈茂林 　张 　伟 　杨 　晟 　姜卫红 ( 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所, 上海 200032 ) ( 摘要 　　SARS 冠状病毒是人的严重急性呼吸综合征的病原体。根据对其他种类冠状病毒的研究结果 , 膜蛋白 M ) 蛋白 是病毒主要的结构蛋白 , 重组 M 蛋白可被用来作为抗原检测对应冠状病毒的感染和制备疫苗。SARS 病毒 M ( 蛋白基因克隆到原核表达载体 pMALcRI 中 , 利用 N 端和 C 端分别融合麦芽糖结合蛋白 maltose binding protein 和 MxeGyrA intein CBD 的策略 , 在大肠杆菌中初步表达了重组 M 蛋白 , 并通过 Western 印迹和质谱对蛋白质进行了鉴 定。重组蛋白质经亲和层析得到了部分纯化 , 纯化后的蛋白质将用于功能研究与诊断试剂盒的研制。 ( ) 关键词 　　严重急性呼吸综合征 SARS ; 冠状病毒 ; 重组 M 蛋白 ( 　　严重急性呼吸综合征 severe acute respiratory 基础 , 同时也是研究 SARS 病毒蛋白质结构与功能 ) [1 ,2 ] 的必需环节。 syndrome , SARS 是新发现的传染病 。SARS 冠状 病毒为导致该病的病原体[3 ,4 ] , 其基因组测序已经 完成[5 ,6 ] 。 ( ) 1 　材料和方法 Materials 通过对已知冠状病毒的基因组比较 , SARS 病 1. 1 　材料 ( ) [7 ] 毒的膜蛋白 M 蛋白 基因得到确认 。M 蛋白是冠 1. 1. 1 　质粒、菌株与培养基 　　大肠杆菌表达质粒 状病毒基质糖蛋白 , 由221 个氨基酸构成。分析显 pMALcRI 和 pTXB1 购自 New England Biolabs 公司。 示 M 蛋白存在三个跨膜螺旋 , 大致定位于 15～37 、 ( ) 质粒 pBluescript SK + , 大肠杆菌宿主细胞 JM109 50～72 和 77～99 氨基酸。M