SDS法和CTAB法提取西藏黄籽油菜干种子DNA用于SSR分析.pdfVIP

《西藏科技》20l1年8期(总第221期) 科技兴农 SDS法和CTAB法提取西藏黄籽油菜 干种子 DNA用于 SSR分析 旦 巴 何燕 卓嘎 孟霞 王建林 (西藏农牧学院高原作物分子育种实验室，西藏 林芝 860000) 摘 要：选用 8个西藏黄籽油菜干种子作材料 ，分别采用 SDS和 CTAB的微量法提取基 因组 DNA，取 适量的该DNA进行琼脂糖凝胶 电泳，并利用uvl100型紫外分光光度计测定所提取的DNA在 260nm、 280nm 的光密度值及 比值 ，并进行 SSR标记。结果表 明，2种方法均能从西藏黄籽油菜干种子 中提取 出一定量的比较完整且纯度较高的DNA，用琼脂糖凝胶检测时，表现带型清亮，每个样品带型较一致 ， 利用SDS法CTAB法提取西藏黄籽油菜干种子DNA，均适用于SSR分析。但用CTAB法提取的干种 子 DNA 的纯度更高、量 多、质量更好，更适于制备 SSR分子标记的模板 DNA。 关键词：黄籽油菜 干种子 DNA提取 SDS CTAB SSR(simplesequencerepeats)标记 是建立 在 8．0，20mM EDTAPH8．0，2 CTAB)，迅速磨成浆 PCR(PolymeraseChainReaction)基础上 的分子遗传 湖状；将其移入 1．5ml离心管 中，在 65℃水欲锅 中温 标记 ，又称为微卫星 DNA(Microsatellites)标记，是一 育 1小时，期问每隔 1O分钟剧烈震荡 2～3分钟；温育 种由2--5个核苷酸为重复单位组成 的长达几十个核 完成后加入等体积的氯仿 ／异戊醇 ，颠倒离心管混匀 ， 苷酸的串联重复序列 ，现证 明存在于绝大多数真核生 室温下 12000rpm／min，离心 10rain；取上清液转入另 物基因组中。2o世纪 90年代 以来 已经被遗传家广泛 一 1．5ml离心管 中；加上清液 1 ／10体积 的 3M 用于大 田作物，品种鉴定与分类等种质资源研究的各 NaAC和等体积冰冻异丙醇，10000rpm离心 2min， 个领域 。 收集沉淀 ；用 76 乙醇 (含 10mM NH4AC)浸泡沉淀 油菜为十字花科芸薹属 ，是西藏的主要经济作物。 2分种后 ，弃 乙醇 ，再次用 乙醇清洗一遍 ，在室温下风 西藏油菜资源，有着很好的优势，不少地方分布有非常 干 ；风干后 加 200ulTE(10mM TrisPH7．5，1mM 珍贵的油菜种质资源 ，尤其是黄籽 油菜 品种。迄今为 EDTA pH 8．0，)溶 解 DNA，再 加 人 10ull0rag／ 止 ，关于西藏黄籽油菜 的研究，国内外报道的不多，特 mlRNase在 37℃温育 4O分钟 ，后一20℃保存备用。 别是分子水平的研究更少 。本文 以西藏黄籽油菜种子 1．2．2 SDS微量法。取 自繁黄籽油菜干种子放入冷 为研究材料 ，采用十二烷基磺 酸钠 (SDS)和十六 烷基 冻过的研钵中，先粗磨，加 750ul预热好的提取缓冲液 三乙基溴化铵 (CTAB)法分别提取 了油菜干种子 的 (100mM Tris—HCI，50mM EDTA ，0．5M NaCI，2 DNA，并对提取的DNA的质量进行 比较分析 ，以探讨 SDS，用 NaOH调 PH值为8．0)迅速磨成浆湖状 ；装 哪种方法更适于制备 SSR分子标记的模板 DNA。 入 1．5ml离心管，在 65C水欲锅中温育 l小时，期间 1 材料与方法 每隔 1O分钟剧烈震荡 2～3分钟；温育完成后加入等 1．1 材料 体积 的氯仿 ／异戊醇 颠倒离 心管混匀 ，室温 下 所采用的8个样品来源于山南洛扎县等西藏部分 12000rpm／ra