茶籽饼降解茵的筛选及降解条件优化与发酵效果的研究.pdfVIP

湖南农业科学 2011，(15)：23～26 HunanAgriculturalSciences 茶籽饼降解茵的筛选及降解条件优化与发酵效果的研究 田璨熙，吴永尧 ，娄立起 ，周志成 (湖南农业大学生物科学技术学院，湖南 长沙 410128) 摘 要：为降解利用茶籽饼中所含粗蛋白成分，变废为宝，以生物量与酶活为主要依据，从自然界中筛选得到一株能有效降解具 有较强抑菌作用的茶籽饼的菌株B。该菌株 在茶籽饼质量分数为9％，麦芽糖质量分数2％，初始pH5，接种量为3％，42。c条件 下摇瓶发酵84h后，降解率为48．7％；将此菌与能高效降解豆饼的已知菌株分别对原底物进行摇瓶发酵对比，结果表明：已知菌 受到茶籽饼抑制作用，而菌株T7的生长及产酶则受到茶籽饼的促进作用 ，对茶籽饼的降解效果显著。 关键词 ：茶籽饼；降解菌筛选；发酵条件；蛋白酶 中图分类号：SI82 文献标识码：A 文章编号：1006—060X(2011)15—0023—04 我国是世界油茶栽培面积最大，品种最丰富、 培养基 (g／L)：(a)种子培养基为牛肉膏 5，蛋白胨 茶油产量最高的国家。据不完全统计，全国每年产 10，NaC15，自然 pH值 ；(b)摇瓶培养基 ：茶籽饼 茶籽约6000万t，榨油后的茶籽饼在 3500万t以 40。斜面培养基为另加质量分数为2％琼脂的种子 上 【。过去多用作燃料或肥料，对茶籽饼的综合利 培养基。 用率较低3[1。据报道，茶油下脚料中茶籽饼粗蛋白含 1．2 方 法 量为 12％一16％E43，粗蛋 白中，不仅必需氨基酸含量 1．2．1 筛选方法 将采集的土壤和水样等样品按 较其它饼粕高嘲，而且赖氨酸的含量较高[6-71。说明茶 质量分数4％的接种量分别接种到富集培养基37~(2 籽饼具有极高的饲料开发价值 ，对于改良土壤板 条件下振荡培养3d。利用蛋白酶对酪素的水解作 结、提高土壤肥力等方面也具有很高的潜在利用价 用进行平板法筛选，将初筛后的活性单菌落菌置于 值。可见，若能利用科学的方法将对其所含有的粗 4~C冰箱种斜面保存，用于进一步复筛。 蛋白成分进行降解利用，茶籽饼的开发利用将变废 将初筛的菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基中 为宝，前景诱人。 培养24h后，接种于含6％的茶籽饼的复筛摇瓶培 由于茶籽饼中含有天然的抑菌成分，抗菌作用 养基中振荡培养 3d，进行复筛。 较强f8]，以致于一般的微生物不能以茶籽饼为底物 1．2．2 分析方法 分析方法分为如下几个部分。 生长9[1，利用微生物对其进行降解比较困难，目前国 (a)降解菌筛选方法。初筛用水解圈法对将接种于 内用微生物对茶籽饼进行有效降解的报道较少，因 富集培养基中培养 3d后菌落进行多次平板划线 此笔者针对 目前国内缺乏对茶籽饼进行微生物降 纯化并保留；将初筛菌置于摇瓶中发酵通过酶活及 解研究的现状，对能降解茶籽饼中粗蛋白的菌种进 生物量测定进行复筛。(b)粗酶液制备。供试菌株摇 行广泛筛选，并对菌株发酵条件进行优化 ，为茶籽 瓶发酵液经纱布过滤后，8000r／min离心20min，收 饼综合开发利用提供一定的理论和实验依据。 集上清液。(c)游离氨基酸含量测定。用茚三酮法[O·l (d)蛋 白酶活力的测定寺哥林酚法测定…】。酶活力定 1 材料与方法 义为 1mL液体酶在 40℃和pH9的条件下 1min 1．1