灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术研究.docVIP

中国食用菌２００８，２７（２）：３４－３６ ＥＤＩＢＬＥ ＦＵＮＧＩ ＯＦ ＣＨＩＮＡ  ＣＮ５３－１０５４／Ｑ  ＩＳＳＮ １００３－８３１０  灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究 李淑芳，张志军，李海德 （天津市林业果树研究所，天津３００１ １２） 摘要：通过灵芝孢子破壁技术的研究，选择适合灵芝孢子油提取的前处理方法。分别采用萌发、超微粉碎、酶 解进行灵芝孢子的破壁，效果不理想；将３种方法综合进行灵芝孢子破壁，取得较好效果，破壁率达到 ８５．３８％。因此。采用综合破壁法作为灵芝孢子油提取的前处理手段较合适。 关键词：灵芝孢子；破壁；孢子油 中图分类号：￥６４６．９文献标识码：Ａ文章编号：１００３—８３１０（２００８）０２－００３４—０３ 灵芝是著名的药用真菌之一。是华夏中草药宝库中的 一支奇葩，千百年来一直被民间视为仙草。灵芝的有效成 分有灵芝多糖类、三萜类、核苷类、甾醇类、生物碱类、 呋喃衍生物、氨基酸多肽类、矿物元素、脂肪酸等。灵芝 具有多方面的药理作用。且毒性很低。其药理作用有：抗 肿瘤、免疫调节、抗放射、镇静、安定、强心、降压、镇 咳、平喘、降血糖等１２１。  圈１  ２５格血球计数盘图  图２用于夏芝孢子计数的中方格 近年来对灵芝属真菌的化学成分及临床作用的研究较 多．其中对灵芝孢子的研究近年颇为引人关注．尤其是灵 芝孢子油的研究正逐渐被人们所重视。灵芝孢子是灵芝的 生殖细胞。灵芝孢子油是从灵芝孢子中萃取得到的油状脂 质物。约占灵芝孢子重的２０％１３１．其中含有丰富的三萜类物 质．因其化学结构的多样性而具有广泛的生理活性，对于 提高机体免疫力、耐缺氧能力、降低胆固醇等方面有明显 作用。最新研究表明．灵芝孢子油中的脂质活性物质还具 有显著的抑制肿瘤和抗艾滋病毒的活性。近年来，灵芝孢 子油产品已成为高档保健品中的珍品，具有十分重要的利 用价值和经济价值。 灵芝孢子的孢壁为２层，由几丁质和葡聚糖构成（多 醣壁），且具有同心圆的层网结构，质地坚韧，耐酸碱， 极难氧化分解。因此限制了人们对孢子内有效物质的消化 吸收。为了充分利用灵芝孢子内的有效物质，必须对孢子 粉进行破壁。面积为ｌｍｍ２。深度为１．１０ｍｍ。中央１个大 方格用双线划分为２５个中方格。每个中方格又划分为１６ 个小方格，供计数之用，如图ｌ和图２所示。 １计数方法 １．１用电光分析天平（精度０．１ｉｎｇ）称取２ｍｇ已破壁的灵芝 孢子粉放入１０ｍＬ试管中．再用精密手持滴管在各试管中 加入２ｍＬ的蒸馏水。摇荡５ｍｉｎ左右，使灵芝孢子在水中 收稿日期：２００８—０１—２ｌ 　万方数据 溶解均匀，得到灵芝孢子的悬浊液。 １．２用微量注射器（ＩＯＩ上Ｌ）吸取悬浊液６１．ＬＬ，一次性将悬 浊液滴到计数盘内，并盖上一玻璃片，静置２ｍｉｎ～３ｍｉｎ， 使悬浊液在计数盘内分布均匀．待灵芝孢子粉下沉不再移 动后计数。通过光学显微镜鉴别孢子的破壁与否，未破壁 的孢子壁光滑完整、丰满，双壁结构清晰，个体形态一 致；破壁后，孢子壁不完整、内容物呈不规则块状。 １３灵芝孢子破壁率的计算 灵芝孢子破壁率的计算公式：破壁率＝［（Ａ—Ｂ）／Ａ］ ×１００％ Ａ为破壁前完整孢子数，Ｂ为破壁后完整孢子数。 ２破壁实验 Ｚｌ萌发破壁实验 称取５９灵芝孢子粉，放入培养皿（相对湿度６５％、 温度２０。Ｃ～４８），再加入２０９的２５％灵芝子实体浸出液， 然后放入恒温培养箱中培养２４ｈ。每隔１ｈ取０．０１９试样加 入１０ｍＬ试管中用血球计数板观察计数。 勉超微粉碎实验方法 取ｌＯｇ灵芝孢子粉，加入水ｌＯＯｍＬ，于超微粉碎机内 粉碎３０ｍｉｎ，每５ｎｆｉｎ取样。配比为浓度ｌｍｇ 用血球计数板观察计数。 第２７卷第２期 ∞生物酶法破壁实验  李淑芳等：灵芝孢子油提取研究及灵芝孢子破壁技术的研究 表４超微粉碎对灵芝孢子破壁率的影响  ３５ 酶解法是使用纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、果胶 酶等使灵芝孢子壁降解。达到破壁的目的。本实验使用经 济适用的包含纤维素酶、蛋白酶的复合酶对灵芝孢子进行 破壁处理，用血球计数板观察计数。 经试验可知，影响酶解效果的主要因素有：酶用量、 温度、ｐＨ值、时间。本试验对以上４个因素进行正交试 验，以确定最优酶解条件。因素水平表如表１所示。试验 表１正交试验因素水平表 实验结果见表４。随着时间的延长，超微粉碎可以显 著提高灵芝孢子的破壁率，破壁效果明显：当超微粉碎时 间为３０ｍｉｎ时，破壁率达到２６３１％。 ３．３生物酶法破壁以及酶解条件的确定 从表５中可以看出，在不加酶的情况下。灵芝孢子的 破壁率为零；当加酶后，灵芝孢子的破壁率有了明显的提 高。这说明进行酶水解有利于灵芝孢子的破壁。随着酶用 量的增加，灵芝孢子的破壁率逐渐增大．直到酶用量达到