光基因调控技术的体外光刺激系统设计.pdfVIP

Vol. 4 No.12/ Dec. 2010 光基因调控技术的体外光刺激 系统设计 李秋华 蔚鹏飞 王立平 摘 要 光感基因神经调控技术整合了光学和基因工程学的知识来探究哺乳类或其他动物的神经环路。在未来数年或数十 年内，光感基因神经调控技术会影响生物学系统，由其发展起来的光照设备、医疗器械等将会有极大的发展空间。本文介 绍了一个用于光感基因神经调控技术相关实验的光刺激系统，可根据实验需要，无线控制刺激光源的参数。 关键词 光感基因神经调控技术 ；光刺激；单片机；无线 1 引言 2 系统的光源部分的设计研究 光感基因神经调控技术整合了光学和基因工 在 辐 射 接 收 面 上 的 辐 射 照 度 ( R a d i a n t 程学的知识来探究哺乳类或其他动物的神经环路。 Illumination)定义为辐射在面元上的辐射通量与该面 其原理是将视蛋白基因加上特异启动子通过病毒转 元的面积之比，标记为Ee ，单位为瓦特每平方米(W/ 2 染导入特定的神经元类群，并通过不同参数的光刺 m )。在光感基因技术中，认为最低能刺激细胞的辐 激，来改变该神经元的生理活动，从而调控其所在 射照度为1mW/mm2 。通常LED产商给出的光学参 的整个神经通路，这项技术具有高时空分辨率。表 数为光通量，所以需要进行从光通量到辐射照度的 达基因ChR2的细胞在蓝光的刺激下，使通道打开， 转换计算，其计算过程如图1所示，这也是LED选型 + 2+ 参考的重要依据。选型后，可采用LED阵列的布局形 Na ，Ca 等进入细胞，产生一内向电流，引起细胞 去极化，从而兴奋神经元[1] ；表达基因NaHR的细胞 式，这有两个目的：1）是辐射照度达到要求；2） - 到达培养皿底部的辐射照度更均匀，以免局部照度 在黄光的刺激下，使Cl 进入细胞，胞内氯离子浓度 升高产生导致超级化，从而抑制神经元的活动[2,3]。 过强烧伤细胞。在光源设计中，因为辐射照度可以 叠加，所以采用大功率2×2LED阵列来刺激每一皿细 到目前为止，应用在细胞学研究方向上的光照 胞，图2为2×2LED阵列在细胞培养皿上的布局。图3 系统按照射面积可以分为两类：一类是点照射，即 为为2×2LED阵列辐射照度的仿真。 光照所刺激的细胞或细胞群所需的光照面积较小， 称为局部光刺激(Localizated Photostimulation)， 通常是利用光纤使得光传输到一个点上，其上游光 源可以是发光二极管或激光器 [4,5] ；另一类是二维的 平面光刺激，可以是普通发光二极管(Light-emitting Diode, LED)组成的阵列，或微小型LED组成的阵列 4 [6] 。这一类光照系统也可以加上透镜或光纤使照射面 L E