出口原奶和奶粉中三聚氰胺的快速检测方法 编制说明.docVIP

《出口原奶和奶粉中三聚氰胺的快速检测方法》 编制说明 一、项目概况 1. 标准来源 本标准来源于国家认证认可监督管理委员会下达的制标计划任务《出口原奶和奶粉中三聚氰胺的快速检测方法》（计划编号为2011B299k）。本标准由北京出入境检验检疫局起草。 2. 目的和意义 三聚氰胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。简称三胺，俗称蜜胺、蛋白精，分子式C3N6H6，分子量126.12。 由于三聚氰胺的分子式中含氮量为66%左右，而蛋白质的平均含氮量为16%左右，因此，常被一些不法商人用作食品添加剂，以提升食品检测中的蛋白质含量指标，俗称“蛋白精”。虽然，目前广泛认为三聚氰胺毒性比较低微，但长期摄入仍不容忽视。1994年国际化学品安全规划署和欧洲联盟委员会合编的《国际化学品安全手册》第三卷和国际化学品安全卡片说明：长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。 三聚氰胺带来的食品危机，让人触目惊心。2007年，美国爆发宠物食品受污染事件。事后调查表明：掺杂了≤6.6%三聚氰胺的小麦蛋白粉是宠物食品导致中毒的原因。2008年9月，中国爆发三鹿婴幼儿奶粉受污染事件，导致食用了受污染奶粉的婴幼儿产生肾结石病症，波及了29万婴幼儿，其原因也是奶粉中含有三聚氰胺。同月26日，上海光明食品集团决定，光明食品集团下属冠生园公司生产的大白兔奶糖，个别国家、地区从上海冠生园食品有限公司出口的“大白兔”奶糖中检出三聚氰胺，海外被检出三聚氰胺的部分奶糖正抓紧实施下架、召回等措施。而国家质检总局紧急在全国开展了婴幼儿奶粉三聚氰胺含量专项检查。 2011年4月6日，国家五部委发表联合公告，制定我国三聚氰胺在食品中的限量值。公告规定：婴儿配方食品中三聚氰胺的限量值为1mg/kg，其他食品中三聚氰胺的限量值为2.5mg/kg，高于上述限量的食品一律不得销售。 原料乳及乳制品中三聚氰胺的检测目前较多采用液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱（包括气相色谱-质谱/质谱）法，文献中也有通过免疫方法检测的相关报道，但作为标准的快检方法未见报道。 3、方法概述 本方法依据三聚氰胺的化学性质和理化性质，对应的抗原与抗体特异性结合的原理，分分别利用酶联免疫法和胶体金免疫层析法者两种检测手段，建立了对出口奶粉中三聚氰胺快速检测及筛查的方法；本方法科学合理，灵敏度高、完全满足国内出口检测限量的需要。 本方法经确证条件试验，回收率试验，精密度试验，方法验证试验。结果表明，各项技术指标均完全满足残留检测需要。 4、编制依据 （1）本部分是在参考有关标准、文献资料的基础上，通过大量基础性实验研究、实际样品检测和技术验证后，严格按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》、GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》和SN/T 0001-1995《出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》的要求编写的。 （2）本标准方法以参照采用国内外有关文献为基础，经研究、改进和验证后制定的。 二、实验技术论证 （一）酶联免疫法 1、方法适用范围 采用本方法我们对原奶和奶粉中的三聚氰胺进行了检验，没有发现干扰情况，且半定量效果准确，精密度好。 2、前处理条件的选择 由于三聚氰胺性质稳定，且是人为非法添加，不存在物质的代谢过程，因此检测时不需要进行特殊的前处理。直接取原奶制品或奶粉复溶后进行检测即可。 3、标准曲线的建立 取已包被好的酶标板30孔，每4孔分别加入0 μg/L、10 μg/L、30 μg/L、90 μg/L、270 μg/L、810 μg/L标准溶液各50 μL，然后，加入已稀释好的三聚氰胺抗体50 μL，室温下（25±2℃）反应30 min，取出洗板4次，拍干。每孔加入100 μL酶标Ⅱ抗，室温下（25±2℃）反应30 min，取出洗板4次，拍干。加入100 μL A、B混合液，避光反应15 min，用50 μL终止液终止反应，置双波长（测定波长450 nm，参比波长 630 nm）测定吸光度值。每一浓度标准溶液吸光度值（B）平均值除以第一个标准（0标准）吸光度值（B0）的平均值再乘以100%，即百分吸光度值。以三聚氰胺标准品浓度(μg/L)的自然对数值为X轴，百分吸光度值B/B0为Y轴，绘制标准曲线图。本方法提供的标准曲线范围为10~810 μg/L。 图1 标准曲线 4、检测限 一般规定20份空白样品的测定平均值加3倍标准差可作为评价检测方法灵敏度的指标，作为检测限。取经验证的20份空白原奶和20份奶粉样品，用本方法进行测定，结果见表1。经过统计，本方法对原奶中三聚氰胺的检测限为50 μg/L，对奶粉中三聚氰胺检测限为150 μg/kg。 5、准