化学品 我国本土蛙类黑斑蛙胚胎毒性试验.docVIP

目 次前 言 II 1 范围 3 2 术语和定义 3 3 缩略语 3 4 方法原理 3 5 受试物信息及储备液配制 4 5.1 受试物信息 4 5.2 储备液配制 4 6 设备与材料 4 6.1 仪器设备 4 6.2 材料与试剂 4 7 黑斑蛙种蛙 4 8 试验程序 5 8.1 黑斑蛙诱导产卵及胚胎准备 5 8.2 受试物储备液 5 8.3 预实验 5 8.4 正式试验 5 9 数据处理 5 10 质量控制 5 11 试验报告 6 参考文献 7 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准技术内容根据2004年美国试验与材料协会（ASTM）提出《非洲爪蟾胚胎致畸试验》（FETAX试验）[1]，建议将其作为鉴别化学物质发育毒性的方法使用。近年来，有大量相关污染物胚胎发育毒性影响的报道[2]。在参考相关资料的基础上，我们提出了《化学品 黑斑蛙胚胎发育毒性试验》方法，以用于测试化学品的胚胎发育毒性作用。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国科学院生态环境研究中心。 本标准主要起草人：陈会明、秦占芬、程艳、苏红巧、崔媛、赵亚娴、李晞。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 化学品 我国本土蛙类黑斑蛙胚胎发育毒性试验 1 范围 本标准规定了《化学品 我国本土蛙类黑斑蛙胚胎发育毒性试验》方法。 本标准适用于化学品对两栖动物胚胎早期发育毒性的测试。 2 术语和定义 下列术语定义缩略语适用于本标准。2.1 半静态法 semi-static method 试验期间每隔24 h更换一次药液，要求化学测试物的性质在这一时间内相对稳定（即浓度波动在初始浓度的20%之内）。 2.2 死亡 death 胚胎心跳完全停止的状态。 2.3 濒临死亡 near-death 胚胎有微弱心跳但不能运动、对刺激毫无反应的状态。 3 缩略语 下列术语定义缩略语适用于本标准。LC50 引起50%的受试胚胎死亡的受试物浓度。 3.2 半数致畸浓度 EC50 引起50%的受试胚胎畸形的受试物浓度。 3.3 致畸指数 TI TI =（96h-LC50）/（96h-EC50）。TI是对发育危害的测量。TI值高于1.5意味死亡率和畸形浓度范围有着大的分离，因此，没有胚胎的重大死亡率，意味着所有胚胎潜在的畸形率更大 a) 水中溶解度； b) 蒸汽压； c) 结构式； d) 纯度； e) 在水中和光照条件下的稳定性； f) pKa值； g) 水溶液中的定量分析方法； h) 正辛醇-水的分配系数（POW )； i) 快速生物降解试验结果。 5.2 储备液配制 根据受试物的最终试验浓度确定储备液的浓度，用去离子水或其它合适的溶剂配制受试物储备液；根据储备液在溶剂中的稳定性决定储备液的有效时间；如果受试物易光解，需要对其避光保存。 6 设备与材料 6.1 仪器设备 仪器设备应包括： 1 mg/L）； c) 温度控制（精确至0.1 ℃）； d) pH计（精确至0.1pH）； e) 分析天平（精确至0.0001g）； f) 60mm培养皿； g) 巴斯德吸管。 6.2 材料与试剂 可能用到的试剂（所有试剂应是分析纯，用电导率小于或等于10μS/cm的全玻璃蒸馏水或去离子水配制）包括： ） 7 黑斑蛙种蛙 7.1 种蛙饲养在具有水陆两栖环境的玻璃缸中，水深约10 cm，有可有露出水面的小石子，水生和陆生环境各半。缸中设有供其藏身的遮蔽物。 7.2 饲养用水为经过除氯的自来水，亚硫酸钠pH在6.5 ~ 8.5，电导率500 μS ~ 3000 μS，水质硬度在mg/L ~ 300 mg/L之间（以CaCO3计），总碱度在 50 mg/L~00 mg/L（以CaCO3计）, 碘化物（I-）浓度在0.5 μg/L ~ 10 μg/L，总氨氮 0.5 mg/L，非离子氨 0.02 mg/L亚硝酸盐 0.5 mg/L硝酸盐 50 mg/L总余氯0。 7.3 温度控制在25 ℃ ± 1 ℃,全波长荧光灯营造自然光照条件， 12h明暗交替。每天喂食活体面包虫一次。 8 试验程序 8.1 黑斑蛙诱导产卵及胚胎准备 8.1.1 选1对成年黑斑蛙，每只注射2.5μg促黄体激素释放激素，放到两栖动物诱导繁殖设备中，诱导抱对产卵。 8.1.2 将受精卵用预先准备好的2%（w/v）L-半胱氨酸溶液分两次进行脱膜，使用脱色摇床，总计涡旋30 min ~ 40min。脱膜过程应持续观察，在卵衣移除以后就马上停止。之后用除氯自来水漂洗5次以上。倒入15