人肝癌细胞7402自分泌一氧化氮对其增殖影响及其机理和意义研究.pdf

人肝癌细胞7402自分泌一氧化氮 对其增殖的影响及其机理和意义的研究 博士研究生 姜军梅 导 师 朱菊人 士 丘 一氧化氮(nitricoxide，NO)是生物体内一种结构最简单的 多功能生物信号分子，在人体正常功能调节和许多疾病的发生中 起着十分重要的作用。它是20世纪90年代医学生物学领域内最 重要“明星分子”。它具有氧化还原特性，在生物体内极不稳 定，可在3—5秒之内很快被氧化成硝酸盐或亚硝酸盐，因此测 定较困难，常用GrieSS法直接检测或通过免疫组化、原位杂交、 OXide 分子生物学技术检测其限速酶一一氧化氮合酶(nitriC 体内多种细胞、组织和器官，影响到人体几乎所有重要生理功能。 参与肿瘤、心血管病、神经、内分泌、代谢、炎症、免疫等多种 疾病的发病过程。因此NO在不同细胞和组织的专一性和特异性 是必须重视的课题引’。当今大量的研究表明NO不仅具有第二信 使和神经递质的性能，又是杀伤肿瘤细胞的效应分子。具有前者 OXide StitutiVenitriC 功能的No由原生型一氧化氮合酶(consi oxide nitric 氮合酶(inducible synthase，iNOS)催化产生， 在炎症、肿瘤的发生及发展的过程中具有重要的作用。研究表明 iNOS广泛分布于多种细胞如：巨噬细胞、内皮细胞、肝癌细胞 等肿瘤细胞，已研究证实它催化产生的ljO与巨噬细胞的杀伤能 力及细胞凋亡有关，对瓣瘤细翘的增殖、生长及死亡有着非常重 要的影响。目前的研究多以诱导巨噬细胞it{OS的表达后观察它 与其他细胞的相互作用，或祷外源幢的亿学反应产生镌}{O导入 培养基中或将能够产生NO的无毒试剂加入培养基产生N0，来观 察细胞对其的各种反应。研究结果认为}{O在杀伤勇申瘤细脆方面 与肿瘤坏死因子具有协同作用，能够直接杀伤肿瘤细胞或通过介 导巨噬细胞对肿瘤的细胞毒作用、调节癌基因及抑癌基因的表达 来促进细胞凋亡。但这些作用受到NO的含量和体内条件的限制， 如：低浓度的NO促进肿瘤血管的形成支持其生长，而高浓度的 NO则具有掴反的作用q’；在低氧环境下N0的细胞毒作用较明显 等等q’。对内源性N0的作用的研究已经开展，用小鼠黑色素瘤 K-1735系统的转移榛、菲转移橡、及它们的杂交拣选行体内筛 选研究，发现非转移株在小鼠体内很快的死亡，但转移株在小鼠 体内能够存活，进一步的谚究发现菲转移K-1735麴胞中iNOS的 活性水平较转移K-1735细胞为商，因此K-1735细胞中内源性NO 穗产生与其在爱神小鼠申戆毒活及发生黪转移有关“’。但是对予 通过诱导能够表达iNOS的人肝癌细胞中该酶的表达，从而提高 肝癌缨魏塞分泌蕊翘匏生盛对其增殖、烫亡戆影嗡及视褒和落 床意义的研究尚未见报道，本研究对此进行了详细探讨。 第一部分人肝癌细胞7402自分 泌的一氧化氮对其增殖及凋亡的影响 NO在人体内具有广泛的生物学活性，目前的研究证实N0的 生物活性是通过自分泌、旁分泌、内分泌3种方式来实现的：① 自分泌：是指细胞产生的N0直接作用于自身细胞的生理功能， 如血小板产生的N0直接抑制血小板自身的聚集。②旁分泌：是 指细胞产生的NO作用于邻近细胞，调节邻近细胞生理功能，如 血管内皮细胞产生的NO通过其亲脂性直接进入血管平滑肌细 胞，使血管平滑肌松弛，扩张血管。④内分泌：是指NO与血液 中某些物质(如白蛋白、谷胱甘肽等)结合形成复合物，随血流运 输到远处器官，复合物释放出NO，作用于该器官的靶细胞。对 于一氧化氮(No)与肿瘤关系的研究表明，不论是巨噬细胞、自然 杀伤细胞、内皮细胞分泌的No，还是化学反应提供的外源性No