基于苷元特征显色检测苜蓿总皂苷研究.docVIP

上海交通大学硕士学位论文 基于苷元特征显色检测苜蓿总皂苷的研究 摘 要 苜蓿总皂苷(Total of alfalfa saponins，TAS)是苜蓿属植物中含有的一 类重要的生物活性成分。近年研究表明，苜蓿皂苷具有显著的降血脂和 抗动脉粥样硬化等多种独特的生理功能。同时它还是一种重要的发泡剂、 乳化剂、稳定剂和风味改良剂。本文首先以提取率为考察指标，利用响 应面分析优化了提取苜蓿皂苷的工艺条件；以大孔吸附树脂 AB-8 和阳离 子交换树脂联用富集、纯化总皂苷类成分；用制备高效液相色谱法分离 出一种皂苷单体并用 ESI/MS 法分析确证其结构；在此基础上，系统地研 究了基于苜蓿皂苷苷元比色法测定苜蓿总皂苷含量的方法。其研究的主 要结果如下： 研究和比较了 2 种不同的 TAS 提取方法，（1）以乙醇溶液为溶剂， 通过对影响萃取效果的单因素分析，建立响应面分析实验，优化提取工 艺条件。最佳提取条件为：提取温度 45 、提取时间 154 min、液料比 (ml/ g)=10:1、乙醇浓度 63%，提取 1 次，提取率为 78.7%。（2）超声法 提取 TAS，结果表明：用 20 kHz 超声波提取 60 min，提取率为 97.41%。 这种方法的提取率与加热搅拌提取 2 次（合计提取时间 240 min）的皂苷 提取率基本相等。 脱脂苜蓿根粉的醇提液中含有糖类物质和色素，采用大孔树脂吸附 I 上海交通大学硕士学位论文 和阳离子交换树脂去除提取液中的杂质物质。实验确定AB-8树脂的吸附 条件为：溶液pH为8～9、NaCl浓度为0.80%、苜蓿皂苷溶液的初始浓度 以8 mg/ml为宜、上样流速为3 BV/h、洗脱液为95%的乙醇。收集洗脱液 并减压蒸干后，溶在15%的甲醇中，然后过阳离子交换柱脱色。TLC鉴定 结果表明，纯化后的产品中含有苜蓿皂苷类成分纯度高。 以制备高效液相色谱法从脱脂苜蓿根粉乙醇提取并经过上述分离初 步纯化的粗提物中分离出一种皂苷单体，通过 ESI/MS 分析确证其结构为 3-O-[β-D-glucopyranosyl]-28-O-[β-D-xylopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyra nosyl(1→2)-α-L-arabinopyranoside] medicagenate。 建立了利用皂苷元特征显色测定苜蓿皂苷含量的定量方法。以香草 醛-高氯酸为显色剂，冰醋酸为溶剂，使皂苷元显色，用分光光度法在波 长为 560 nm 处测定苜蓿皂苷元的含量。以 3-O-[β-D-glucopyranosyl]-28 -O-[β-D-xylopyranosyl(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-α-L-arabinopyran oside] medicagenate酸水解后的苷元为标样，建立的标准方程为 y = 0.0031x，R2 = 0.9993， 该回归曲线高度显著，线性和稳定性可靠。 关键词：苜蓿皂苷，提取，纯化，制备，大孔树脂 . II 上海交通大学硕士学位论文 STUDIES ON THE ROBUST DETERMINATION METHOD OF ALFALFA SAPONINS ABSTRACT Total of alfalfa saponins (TAS) is an important component in medic plant, which may be biologically active in reducing plasma cholesterol and guarding against atherosclerosis. So it has a good prospect of clinical 7application and a high value to be developed into a new remedy. In addition, saponin is an important vesicant, emulsion, steady-reagent and flavor-reagent. In this thesis, the technical parameters of water and ethanol reflux extraction was optimized by response surface analysis; a TAS purification method was established with macroporous resin AB-8 adsorption-cation exchange resin chromatography; a triterpene glycoside from