Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶2在移植静脉术后的表达与内膜增生的关系.pdfVIP

中文摘要 前 言 动脉粥样硬化导致的冠状动脉和周围动脉狭窄和闭塞有较高 的致死率和致残率。目前，自体静脉移植术仍是其主要治疗手段， 然而自体静脉移植物进人动脉血液循环后，由于发生移植血管内 膜增生、血栓形成等，远期通畅率并不高，约有15%一40%的移植 血管在术后1-2年内会发生狭窄和/或闭塞。移植血管术后狭窄 已成为困扰血管外科的难题之一，也是世界范围内的研究热点。 洲研究表明，造成血管移植术后狭窄和闭塞的主要原因是内膜 增生淇特点是中膜平滑肌细胞向内膜迁移、增殖并分泌大量细胞 外基质。在正常静脉壁中，由于基底膜的屏障作用，SMC被严格 限制在中膜内。基底膜是以VI型胶原为主要支架，并由糖蛋白及 蛋白多糖等形成的网状结构。由于IV型胶原独特的螺旋结构，大 部分蛋白酶对其无降解作用，但基质金属蛋白酶一2的自然底物 主要是IV型胶原分子，可以降解IV型胶原等基底膜成分，破坏其 完整性。MMP一2降解IV型胶原后浮嚼除了基底膜对SMC的 限制作用，为其迁移、增殖铺“平道路”岁 近年来的研究表明，动脉损伤后，SMC突破基底膜屏障，向内 膜迁移、增殖是导致血管内膜增厚及粥样斑块形成的关键。体外 和体内实验均证实MMP一2在这一病理过程中发挥极为重要的 作用，并且MMP-2的作用是独立的。但用整体动物动态观察静 脉移植术后，内膜增生(IntimalHyperplasiaIII)发生过程中IV型 胶原和MMP-2表达及与SMC增殖之间的关系尚少有报道。 本实验通过建立大鼠自体静脉移植模型，观察静脉移植术后 不同时间内，SMC增殖、IV型胶原和MMP一2的动态变化，探讨 IV型胶原、MMP一2与移植静脉内膜增生的关系，为治疗IH提供 一个新靶点。 材料和方法 实验材料:Wistar大鼠;多聚赖氨酸、AEPS,DEPC、五滨脱氧 尿核昔(5一“Brdu);IV型胶原单克隆抗体、MMP一2单克隆抗体、 SP法试剂盒;IV型胶原原位杂交探针、MMP一2原位杂交探针、原 位杂交检测试剂盒、原位杂交专用盖玻片;PBS,SCC、胃蛋白酶、复 合消化酶;VanGiesons染液,3%胃蛋白酶液;10%水合氯醛、肝素 钠注射液等。手术显微镜;显微手术器械及10/0一11/0显微缝合 线;计算机图像分析仪，显微拍摄系统。实验方法:采用大鼠自体 静脉移植模型，分别于术后不同时间处死动物。大鼠处死前肌肉 注射5一Brdu。切取移植静脉及左侧颈总静脉内侧支作对照。标 本行HE,Verhoeff弹力纤维染色、SP法5、一Brdu,IV型胶原、MMP 一2免疫组化染色，原位杂交探针检测IV型胶原和MMP一2mR- NA表达。采用计算机图象分析仪测量移植静脉内膜与中膜的厚 度/面积比，5、一Brdu阳性细胞百分比，IV型胶原和MMP一2蛋白 和mRNA阳性表达百分比。 实验结果 术后3天，内皮细胞(EC)脱落，管腔内有薄层血栓形成，管壁 水肿，有炎性细胞浸润。术后1周，移植静脉开始内皮化，新生内 膜中出现细胞成分。术后2一8周，内膜增生明显，细胞成分也明 显增多，以术后第2-4周内膜增生程度和细胞成分增多最为明 显。术后8一12周，内膜增生程度有下降趋势，细胞成分也随之减 少。5、一Brdu阳性细胞自术后第1周开始增多，与正常静脉相比， 差异显著(P0.05)。术后第2一4周，5-Brdu阳性细胞表达 8一12 ，差异不显著(P0.05)。术后 高.漏如施簌明显减少，与术后第2-4周相比，等曼曼制P P 0.05);但与正常静脉相比，5一Brdu阳性细胞仍然?Aa:z1 0.05)。 _，、一 IV型胶原在正常静脉管壁，主要分布于内膜下，}A竿0, 中膜亦有少量阳性表达。术后”天，W型胶原的