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眼点拟微球藻抗DCMU突变体的特性及psbA
基因的研究
摘要
本文利用紫外线对眼点拟微球藻进行诱变,然后在除草剂DCMU的压力下
筛选到了对其抗性的突变体,研究了它的生长、叶绿素a和总脂含量、脂肪酸组
成、DNA提取条件的优化及叶绿体的部分psbA基因,结果如下:
DCMU培养条件下,突变体生长良好而野生型的生长受到完全抑制。进一步的实
验结果表明,三株突变体的生长在不同的抑制剂的浓度下受到完全抑制,最高的
达到1.j×10一mol/L.DCMU不存在的情况下,突变体的生长速率和叶绿素a含
量与野生型的相近,而总脂含量相应地降低14.01%。突变体在DCMU存在时,其
EPA(20:5)和花生四烯酸(20:4)的含量较野生型正常情况培养时的高,但比
and
野生型在有DCMU存在时的低;另外,16:0,16:10918:10)9的含量明显地
较野生型正常情况培养时高。j√
DNA的提取用LiCl法.1当LiCl的浓度在0.6、o.8mol/L时,每毫克湿藻泥
提取的DNA量达到45.56ng、低于或高于此浓度,DNA提取的量下降,在缺少LiCl
的条件下,仅能提取少量的DNA;EDTA的浓度在20删nol/L时,提取的DN^量较
大;在缺少EDTA的条件下,藻细胞DNA的提取量明显减少;提取液中PvP的浓
度在0.4%、Sarcosyl在0.8%时,DNA提取的最较大并且基本维持不变:热处理
时间在20、50min时,DNA提取量最多,不经过热处理藻细胞仅提取少量的DNA:
大。; .
提,取的ONA分子量大小约23kb,以其为模板进往PcR反应/(引物
列与OdontellaSinensiS中编码类囊体膜蛋白Dl的psbA基因的部分序列有很
高的同源性,证实目的序列是眼点拟微球藻的部分psbA基因。
由扩增出的突变体和野生型的序列结果比较可知:在扩增出的核苷酸第610、
在突变体中变成了Val、Gln、Ser、Val。氨基酸的替代造成了对DCMU的抗性。
r 、,
关键词突变体,f野生型,DCMU,脂肪酸,psbA
、 /
in
and Gene
characterization
Researchon psbA
resistantDCMU
oculatamutants to
Nannochloropsis
i min(Marine
Zhangj biology)
Directed xue
Professor
by Zhangcheng
Abstract
in aset
Ultravioletmutationhasresultedtheisolationof ofNannochloropsis
mutants
oculata resistantto totaI content.
DCMU.Growth.Chlorophyll口andlipid
of acidsinthemutantsand
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