Cbfa1定向调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究.DOCVIP

临床医学论文-Cbfa1定向调控骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究 ?????????????????? 作者：王溪原????王越晖???倪劲松????王心蕊 【关键词】? Cbfa1定向 ?【摘要】 目的 研究核心结合因子（Cbfa1）调控骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为成骨细胞的分子机制。方法 用Perˉcoll密度梯度离心法分离获得人、大鼠和小鼠的MSCs，通过HE、细胞化学、免疫细胞化学、免疫荧光及透射电镜等方法进行鉴定。传代培养后的MSCs分别用重组真核表达载体pcDNA3.1（+）/Cbfal-Ⅱ通过脂质体系统转染，用Northern Blot检测三种成骨细胞特异性细胞外基质蛋白mRNA的表达情况。结果 转染后人、大鼠和小鼠的MSCs都有骨钙素、骨桥接蛋白和Ⅰ型胶原的表达，三者间无明显差别。结论 Cbfa1在转录水平定向调控间充质干细胞分化为成骨细胞，可应用于骨科疾患的基因治疗。 关键词 核心结合因子 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 分化. 【Abstract】 Objective To investigate the molecular regulation mechanisms of Cbfal to differentiation of mesˉenchymal stem cells（MSCs）to osteoblast.Methods MSCs come from bone marrow of human beings，rats and mice with the method ofPercoll density gradient centrifuging，and MSCs were evaluated with combinationmethods，including HE，cytochemistry，immunochemistry，immunofluorescence analysis and transmission electron microscope.Subcultured MSCs were transfected by recombinant eukaryon expression vector，pcDNA3.1（+）/Cbfal-Ⅱand pCMV5/Cbfal-Ⅲ，under the transfection system of liposomes.Northern Blotwas used to detect the mRNAs of extracellular matrix proˉtein（ECMP）of osteobalst.Results Expression of osteocalcin，osteopontin，typeⅠcollagen mRNAs were detected in transfected MSCs.No significant difference can be found among three different MSCs.ConclusionCbfal can regulate differentiation from MSCs to osteoblast on transcription level，and can be applied to treat orthopedic diseases. Key words core binding factorα1 mesenchymal stem cells osteobalst differentiation 骨髓间充质干细胞（MSCs）具有多分化潜能，在不同调控因子作用下可以向成骨细胞、软骨细胞、成肌细胞、脂肪细胞、神经胶质细胞、血管内皮细胞等方向分化。其作为组织工程的种子细胞具有明显的优势;通过自体骨髓穿刺即可获得，副损伤轻微;分离筛选简单，培养扩增迅速;应用范围广泛，可体外调控分化为所有中胚层来源的组织;回植体内不会产生组织配型和免疫排斥反应;无肿瘤化倾向;可避免伦理、法律等问题。 MSCs向成骨细胞方向分化受一系列激素、细胞因子和转录因子的调控，其中起决定作用的是核结合因子α1（Cbˉfal），也称成骨细胞特异性因子2（Osf2）。Cbfal可于转录水平使MSCs定向分化为成骨细胞，也可使软骨细胞肥大化，进而促进软骨内化骨，表达骨钙素、骨桥蛋白和Ⅰ型胶原等成骨细胞特异性产物。 Cbfal序列是高度保守的，果蝇、斑马鱼、原鸡、小鼠和人的等位基因中编码区99%同源，表达的蛋白只有几个氨基酸的差异。因此，其他种属的Cbfal经提纯后可应用于治疗人类骨科疑难病症如骨缺损、骨不连、骨发育障碍等。 1 材料与方法 1.1 材料 实验所用C57/B16小鼠和Wistar大鼠由吉林大学动物中心提供，