人ACAT2基因的转录调控研究.pdfVIP

摘 要 胆固醇酞基转移酶(ACAT)催化长链脂肪酸与游离胆固醇反应形成胆固醇 (酞基辅酶:‘ 在胆固醇代谢平衡及动脉粥样硬化症发生过程中都起重要作用。目前已鉴定了2种人 基因:ACAT-1和ACAT-2。人ACAT-2主要在胎肝和小肠中有较高的表达，在小肠中 主要集中在绒毛部分，因此推测ACAT-2可能参与了肝和小肠中的脂蛋白装配以及食物来 源的胆固醇的吸收，但ACAT-2基因的组织特异性表达调控还有待进一步研究乡一本研究 论文主要对人ACAT-2基因的表达调控进行了研究。 运用 LA-PCR技术， 并进行序列测定等一系列分析，克隆、测定并分析了人ACAT-2 ACAT-2基因上游 1252帅序列输入微机进行分析，发现这段序 基因5上“游序“。色 列集中了Cdx-2及SP1,AP2,GATA等顺式作用元件的特征序列，表明这段序列是典型的 转录启动子区。进一步利用高灵敏度的荧光素酶报告基因载体，构建了包含不同长度上游 片段的一系列表达质粒，用磷酸钙方法转染Caco-2,HepG2,THP-1及CHO等细胞，进行 瞬时表达研究，测定细胞裂解产物荧光素酶活性，确定了ACAT-2上游启动子的转录活性。 此启动子表现出细胞特异性和分化依赖性，进一步研究发现这种细胞特异性和分化依赖 性是由转录因子Cdx-2引起的。方 ，“~‘中’“刁、中J，“““护’峙目Jod 为了进一步研究转录因子Cdx-2对人ACAT-2基因的调控，克隆了部分Cdx-2的DNA 并构建了N端GST融合的表达质粒沁EX-mCdx-2s，利用大肠杆菌表达系统，表达纯化了 融合蛋白GST-mCdx-2s，制得并纯化了兔多克隆抗体。妞用该抗体，进一步检测了Cdx-2 在不同细胞中的表达，发现其表达具有细胞特异性和分化依赖性，在分化的Caco-2细胞有 高表达，同时，EMSA证明有Cdx-2与ACAT-2基因上游启动子结合，表明在Caco-2细胞 中Cdx一2调控ACAT-2的表达。 分 关键词:ACAT-2基因了启动子，荧光素酶报告基因丫细胞特异和分化依赖的转录活 性，Cdx-2丫多克隆抗体丫 ABSTRACT Acyl-CoA:cholesterolacyltransferase(ACAT)istheenzymethatcatalyzesthe formationofcholesterolestersfromfreecholesterolandfattyacids.Itplays importantroles incellular cholesterol homeostasis and in early stagesof and atherosclerosis.Uptonow,twohumanACATgenes,ACAT-1 ACAT-2,havebeen identified.Inadulthumantissues,ACAT-2proteinismainlyfoundintheapical regionoftheintestinalvilli.LowlevelofACAT-2proteinisalsodetectablein hepatocytes. So it is hypothesized thatACAT-2 participates in various physiologicalprocess such as lipoproteinassemblyanddietarycholesterol absorption.Thisthesismainlyconcernsthemolecularmechamismsthatgovernthe tissue-specificexpressionofhumanACAT-2gene Inthiswork,the