TNFα在L929细胞中表达调控研究神经干细胞培养、鉴定及外源基因在其中表达.pdfVIP

TNF一。在L92940胞中表达调拉的研究 TNF-_a在L929MA中表达调控的研究 摘 要 TNF(tumornecrosisfactor)是生物体内非常重要的细胞因子，分布广泛，具有 多种功能，在发育，炎症反应，细胞的退化、凋亡。中都起着重抖用派很多 病理过程中，机械损伤、化学物质和外界病原的慢入都能使TNF的表达增强，继 而诱导产生其它细胞因子及释放自由基等一系列反应.因此研究其表达调控是非常 有意义的工作，一方面可以了解TNF在这些病理过程中的诱导机制，相应的信号 传递途径;另一方面能为这些疾病的早期控制提供参考了 我们以EGFP(enhancedgreenfluorescenceprotein)作为报告基因，将TNF5，端 2.3Kb的片段克隆至载体上，转染C6.PC12和L929细胞，发现均有绿色荧光蛋 白的组成型表达;而当TNF3UTR序列同5端序列同时克隆至载体上时，以上三 种细胞中报告基因均无表达，说明3UTR对TNF的表达有抑制作用。在3UTR存 在的前提下，在报告基因5’端加上CMV(cytomegalovirus)启动子时，转染L929细 胞有荧光;而加上TNF5端仅含TATABox及下游序列的片段时没有荧光，表明 3UTR对基因表达的抑制需要5端序列(很可能是5UTR)的共同参与. 才此1夕，卜我们构建了。5，端不同片段缺失的系列载体，在转染L92，细胞后发 现荧光强度没有明显区别，表明在L929细胞中，各种片段组合对TNF的转录强度 没有大的影响。用LPS(lipopolysaccharide)诱导稳定转染了报告载体的细胞，荧光 并没有从无到有或由弱变强，可见LPS在其它细胞中对TNF表达起作用的诱导机 制在L929细胞中不存在，其后的RT-PCR实验结果也证实了这一点。丫 关健词:TNF，转染，EGFP TNF-。在L929vi胞中表达调拉的研究 Abstract TNFhasveryimportantfunctionintheorganism.Inconsistentwithitswide distribution,itisamultiplefunctionalmediatorintheprocessofdevelopmentalmodeling, inflammation,cellapoptosisanddegeneration.Inmanypathologicalcourses,mechanical trauma,chemicalsubstancesandtheinfiltrationofexogenousantigenswillenhancethe expressionofTNF,whichthenleadstotheproductionofothercytokinesandtherelease ofrfeeradicals.Duetothesereasons,theresearchontheexpressionofTNFisuseful,not onlyfortheelucidationofitsregulationmechanism,butalsoforofferingmorereferences fortheearlycontrolofmanydiseases WeselectedEGFP(enhancedgreenfluorescenceprotein)asthereportgeneand cloned5upstreamregulatorysequences(2.3Kb)ontothevector.ThecelllinesC6. PC12andL929cellsweretransfectedwiththerecombinantplamidsharboringreporter geneandallofthecellsshowedaconstitutiveexpressionofEGFP.When3UTRofTNT geneisadded,nogreencellsareseenafterthetransfection.Itindicatedthatthe3UTR mayplayaninhibitoryroleinthegeneexpression.With3UTRonthevector,aCMV promotor~ addedonthe5endofreportergeneandthensomegreencellsar