钒酸盐氧化法测定血清胆红素的分析评价.DOCVIP

临床医学论文-钒酸盐氧化法测定血清胆红素的分析评价 【摘要】? 目的：对测定胆红素的钒酸盐氧化法进行分析评价。方法：用钒酸盐氧化法测定胆红素，并对其的精密度、稳定性、灵敏度及干扰因素进行分析。结果：钒酸盐氧化法测定胆红素的批内、批间CV3.25%，可信检测范围可达:钒酸盐总胆红素(TBil)684 μmol/L,直接胆红素(DBil)342 μmol/L，回收率达到98.1%～102.4%。用1∶8肝素抗凝，测定直接胆红素明显降低，P0.01；1∶10肝素抗凝，测定直接胆红素，有轻度的负干扰。维生素C≤0.05 g/L时，无干扰，而溶血及脂质对钒酸盐氧化法干扰小。结论：钒酸盐氧化法应用方便，重复性好，灵敏度高，抗干扰性强。 【关键词】? 胆红素；钒酸盐氧化法；肝素抗凝 　　1993年日本学者Tokuda发表了血清胆红素的钒酸盐氧化测定法。随着商品化钒酸盐胆红素氧化法试剂的推广，目前国内用户众多［1］。本文对其精密度、稳定性、灵敏度及干扰因素进行评价和分析。 　　1? 材料和方法 　　1.1? 试剂和仪器　　　　　1.1.1? 试剂? 钒酸盐总胆红素（TBil）试剂盒、直接胆红素（DBil）试剂盒由东瓯生物工程有限公司提供，临床用20%英脱利匹特脂肪乳由华瑞制药有限公司提供，维生素C由湖北中天爱白药业有限公司提供，12 500 U/2 ml肝素注射液由天津市生物化学制药厂提供。血红蛋白液的制备：取1份约3 ml肝素钠抗凝血，反复加入生理盐水洗涤，最后加入蒸馏水离心取上清液，用KX21N血细胞分析仪测Hb为100 g/L。 　　1.1.2? 仪器? 日立7060全自动生化分析仪，Sysmex KX21N血细胞分析仪。 　　1.1.3? 统计学处理? 计量资料数据以±s表示，采用配对t检验。P0.05具有统计学意义，使用SPSS 10.0软件进行统计分析。 　　1.2? 测定原理? 在pH 3附近，表面活性剂和钒酸作用于血清TBil，使之氧化成胆绿素，使胆红素所特有的黄色减少，由此测定钒酸作用前后450 nm吸光度的变化求出血清中TBil的浓度。在pH 3附近，当试剂中缺少表面活性剂时，钒酸只与血清中结合胆红素作用，使之氧化成胆绿素，此时测定450 nm吸光度下降值求出血清中DBil的浓度。 　　1.3? 主要测定参数? 在日立7060型全自动生化分析仪商用钒酸盐氧化法测定血清胆红素主要参数如下:波长450/546 nm；温度37°；方法为二点终点法。试剂Ⅰ280 μl，样本10 μl, 反应5 min,读取第1点吸光度；然后加入试剂Ⅱ 70 μl，再反应5 min,读取第2点吸光度。 　　2? 结果 　　2.1? 精密度? 用一中值质控物，连续测定20次，再每天测1次，共20 d，结果见表1。 　　表1? 钒酸盐法测定胆红素的精密度（略） 　　从表1可以看出，钒酸盐测定胆红素，批内及批间都有良好的重复性。 　　2.2? 线性范围? 取TBil为5.8 μmol/L，DBil为1.2 μmol/L的低值血清对TBil为684 μmol/L、DBil为342 μmol/L的患者高值血清分别按1∶5、2∶5、3∶5、4∶5、5∶5的比例稀释，用钒酸盐法测定每份标本的TBil及DBil含量，各浓度均重复测定4次，观察其线性，结果表明TBil在684 μmol/L内、DBil在342 μmol/L内仍保持良好的直线关系。 　　2.3? 回收试验? 在0.9 ml TBil浓度为20.90 μmol/L，DBil浓度为5.90 μmol/L的血清标本中加入0.1 ml胆红素标准液。胆红素标准液浓度：高值TBil为255.60 μmol/L，DBil为19.40 μmol/L；中值TBil为148.68 μmol/L，DBil为48.16 μmol/L；低值TBil为72.82 μmol/L，DBil为24.46 μmol/L。测定标本中TBil、DBil浓度。钒酸盐氧化法测定TBil的回收率分别为101.59%、99.3%、98.9%，平均回收率为99.93%；DBil回收率分别为102.4%、98.3%、98.1%，平均回收率为99.6%。 　　3? 干扰试验 　　3.1? 肝素干扰试验? 将新鲜血液分别加入预先备制好的无肝素液、1∶8肝素抗凝液、1∶10肝素抗凝液、1∶12肝素抗凝液20 μl（每毫升血液加入量），使每毫升含肝素0 U、15.6 U、12.5 U、10.4 U，测定TBil、DBil。结果用1∶8肝素抗凝，测定DBil明显降低，P0.01；1∶10肝素抗凝，测定DBil，有轻度的负干扰，见表2。 　　表2? 肝素对胆红素测定的影响（略） 　　注：*示比较差异有显著性，P0.01，平均偏差：（2）、（3）、（4）组