MTT法简介-MTT定义.pptVIP

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2017-09-07 发布于广东
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MTT法简介-MTT定义.ppt

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MTT法简介葛泰根 S1309014 MTT定义 MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium?bromide，汉语化学名为?3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。 MTT配制方法通常，MTT浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验步骤 1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度为，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度至1×104每孔。 2、5%CO2，37℃孵箱内培养24小时后加药（如纳米氧化铜溶液）。 3、5%CO2，37℃孵育24小时，倒置显微镜下观察。 4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。 5、每孔加入100 μL DMSO，震荡30 min，使结晶物充分溶解，用酶标仪在570 nm波长下测定吸光度A，抑制率（%）=（1﹣处理孔A值/对照孔A值）×100%。酶标仪酶标仪的检测原理酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。检测单位用OD值表示， OD是optical density（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系： E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。 Thank you * 酶标仪：即酶联免疫检测仪（ELISA Reader）是酶联免疫吸附试验的专用仪器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计，即用比色法来分析抗原或抗体的含量 *