大鼠脂肪源干细胞的生物学特性及其对大鼠造血干／祖细胞体外扩增影响的研究.pdfVIP

2012年4月第33卷第 4期 ChinJHemato1．Aoril2012．Vo1．33．No．4 · 短 篇 论 著 · 大鼠脂肪源干细胞的生物学特性及其 对大鼠造血干／祖细胞体外扩增影响的研究 毕晓娟 江明 马艳 郝丹 曲建华 段显琳 袁海龙 成体干细胞的研究 目前 以造血干细胞和骨髓 间充质干 检测。 细胞 (BMSC)为主，但取材困难，获得率低等不利因素使其临 3．成骨细胞诱导分化 ：①诱导组取第3代ADSC，待 床应用受限。继 BMSC之后，脂肪源干细胞 (ADSC)成为当 细胞 融合 80％，加 入 成 骨 细胞 诱 导液 (加 10％ FBS、 今干细胞研究领域的又一热点 ，美国的ZUK及 日本的 Mizu— 0．1ixmol／L地塞米松 、50Ixmol／L抗坏血酸、10mmol／LB·甘 no等研究小组对此做了深人研究并取得 了一定 的进展。 油磷酸钠的 LG—DMEM)；②对照组 ：常规培养，每3d换液 ADSC与BMSC有许多相似的生物学特性，但 ADSC还具有 1次。诱导7d后 ，两组均行茜素红染色。 取材方便 、易于培养、收获细胞量大的优势。研究表明BMSC 4．成脂细胞诱导分化 J：①诱导组：取第3代ADSC，待 在造血调控 中起着关键的作用 ，而 BMSC与造血干细胞 细胞融合80％，加入成脂细胞诱导液 (含 10％FBS1p,mol／L 共移植能够促进造血重建，原因在于分泌基质细胞衍生因 地塞米松、200~mol／L吲哚美辛 、0．5mmol／L3-异丁基 l一甲 子一1(SDF．1)[3-5]。但 ADSC是否可作为滋养层与骨髓细胞 基黄嘌呤、10Ixmol／L胰岛素的LG—DMEM培养液)；②对照 共培养刺激造血干／祖细胞 (HSPC)增殖却少见报道，为此我 组 ：常规培养，隔 Et换液。诱导 7d后 ，两组均用油红 O染 们以ADSC体外模拟造血微环境 ，观察其对 自身 HSPC增殖 色。 的作用。 5．BMSC对骨髓单个核细胞 (BMNC)体外长期培养扩 增影响的观察：取大鼠骨髓，制成单细胞悬液，用淋 巴细胞 材料和方法 分离液分离 MNC，用 LG—DMEM培养液调整细胞密度为 5．0×10／ml，置于丝裂霉素 C处理的BMSC上 ，共培养5周 1．大鼠ADSC分离培养 J：本实验 鼠为SPF级 SD大 后用胰蛋白酶消化后重新接种，3h后 ，收集上清中非贴壁细 鼠，均来源于新疆医科大学动物 中心[许可证号 ：scxK(新) 胞，甲基纤维素培养基 (购 自Stemcell公司)进行细胞集落 2003-001]SD大鼠腹腔麻醉后 ，无菌条件下切取双侧腹股沟 培养，培养 14d计数分析。。。 皮下脂肪，置入含有 100U／ml青霉素和 100U／ml链霉素的 6．ADSC支持 HSPC体外扩增能力的观察：将 BMNC作 PBS液中浸泡 10min，用 PBS反复冲洗，去除可见的血管及 为长期培养启动细胞 (LTC—IC)，大鼠胚胎来源成纤维细胞 、 其他非脂肪组织，将脂肪组织剪成约 1mm 小块，置于 10ml BMSC、ADSC作为滋养层。将实验分为 四组：A组：单纯 的0．1％ I型胶原酶中，37℃摇床 120r／min消化30rain，至