中药香加皮水提物抗肿瘤及诱导细胞凋亡作用的实验研究.pdfVIP

中 文 摘 要 中药香加皮水提物抗肿瘤及诱导细胞凋亡作用的 实验研究 摘 要 目的:研究中药香加皮水提取物的体内外抗肿瘤作用及 其诱导肿瘤细胞凋亡的作用，初步探讨香加皮抗肿瘤作用机 理，为抗肿瘤新药开发、研制提供科学依据。 方法:1采用MTT比色法试验研究了香加皮水提取物 对人源性肿瘤细胞株 BGC-823,K562,TE-13,MCF-7, SMMC-7721,BEL-7402,Hela和小鼠源性肿瘤细胞株H22, colon26和S180增殖反应的抑制作用;采用克隆形成试验研 究了香加皮水提取物对具有克隆增生能力的肿瘤细胞株 BGC-823,TE-13和Hela的克隆增生的抑制作用。2.采用足 垫接利，法及右腋皮下接利法‘分别接种colon26和5180刀，!，瘤细 胞建立荷瘤小鼠动物模型，通过灌胃法投入香加皮水提取物 治疗荷瘤小鼠，观察香加皮水提取物对荷瘤小鼠肿瘤形成情 况的影响。3.以体外对香加皮水提取物抑瘤试验效果比较明 显的胃癌细胞株BGC-823为研究对象，采用Gimsa染色技术、 透射电镜技术、流式细胞技术、DNA提取及琼脂糖凝胶电泳 技术测定和观察了中药香加皮水提物诱导肿瘤细胞凋亡的作 用与效果。用半定量RTPCR技术和免疫细胞化学技术分别 从 mRNA水平和蛋白水平研究中药香加皮水提取物诱一导 BGC-823细胞凋亡前后细胞bcl-2,bax,survivin等基因表达 水平的变化，初步分析了中药香加皮水提取物诱导肿瘤细胞 凋亡的机制。 中文 摘 要 结果:1，体外实验结果显示，中药香加皮水提取物对 BGC-823,K562,TE-13、MCF-7,SMMC-7721、BEL-7402, Hela,H22,colon26和S180肿瘤细胞的增殖有较强的抑制作 用，而且有较好的量效关系。其中对人胃癌细胞株BGC-823, 人红白血病细胞株K562和人食管癌细胞株TE-13的抑制作用 尤为明显，其ICs。均小于20}ighnlo 2，体内实验结果显示，与对照组相比，中药香加皮水提 物可明显抑制colon26细胞在小鼠体内肿瘤的形成，高剂量组 (2500pg/ml)对肿瘤瘤重的抑制率可达84.66%。并且可明显 延长5180荷瘤小鼠的生存期，最高剂量组 ((2500}Lg/ntl)对 小鼠的生命延长率可达68.75%0 3香加皮水提物作用于肿瘤细胞后，可诱导较典型的细 胞凋亡形态学变化及超微结构改变，如细胞胞体缩小，胞质 浓缩，胞核向外呈锐角突起，染色质高度浓缩，电子密度增 高，边集于核膜下或呈新月形，有的出现核固缩，核碎裂以 及凋亡小体形成等;经流式细胞分析的DNA直方图上可见 G，期峰出现细胞凋亡峰亚G,期峰，250ug/ml香加皮水提物 处理48h,诱导的胃癌细胞凋亡率可达18.9%，而未处理组细 胞凋亡率只有0.89%:在香加皮水提物作用下，胃癌细胞的 周期也发生了改变，G2/M期细胞明显增多，S期和GcJGi期 细胞比率显著下降，多数细胞被阻滞在G2/M期;香加皮水提 物作用后，细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳结果呈现明显的具有 凋亡特征的梯形条带:RT-PCR和免疫细胞化学实验结果显 示，在香加皮水提物的作用下，BGC-823细胞的bcl.-2和 survivin基因表达受抑，而bax基因的表达上调。白‘们的蛋白 表达水平也发生了相应的变化。 一 碑~~~~~~~~~一，~，， 一 2 中 文 摘 要 结论:1.香加皮水提物体外和体内均具有很强的抗肿瘤 作用。 2 诱导肿瘤细胞凋亡是香加皮水提物发挥抗肿瘤作用的 一条重要途径。经香加皮水提取物作用后，肿瘤细胞bcl-2和 survivin基因表达受抑，而bax基因的表达上调;其相应的蛋 白表达水平也发生了相应的变化。诱导凋亡基因表达水平的 变化是导致细胞i).1亡的根本原因。 关键词:中药香